一、哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生与克服（论文文献综述）
蔡光雨[1]（2020）在《谷氨酸对体外培养小鼠胚胎阻滞阶段的抗氧化水平及后续发育的影响》文中研究指明胚胎体外培养过程中,容易受到各种外源性和内源性因素的影响并产生过量的活性氧。因为无法完全模拟胚胎体内发育环境,缺少体内抗氧化系统的保护使部分胚胎受到氧化损伤,不能正常发育。哺乳动物胚胎发育过程中均存在胚胎阻滞现象,活性氧的大量积累使早期胚胎停滞在某一阶段不能继续发育,导致胚胎死亡。因此为解决这一问题,通常在其体外培养液中添加抗氧化剂等物质来保护早期胚胎的正常发育。谷氨酸是一种重要且较为常见的功能性氨基酸,在保护细胞新陈代谢和对细胞内信号调节发挥着不可替代的作用。本研究旨在探讨谷氨酸对小鼠早期胚胎体外培养的影响。试验分为谷氨酸处理组和M16对照组,通过对昆明小鼠（发育阻滞品系）2-细胞期、4-细胞期及囊胚期的胚胎进行胚胎内活性氧含量,谷胱甘肽水平以及线粒体膜电位的检测及分析。然后对胚胎阻滞阶段,2-细胞期和4-细胞期胚胎内的GPx基因和Nrf2及其相关基因的mRNA以及细胞周期相关基因的表达水平进行了检测。试验结果表明,浓度为6 mmol/L的谷氨酸处理组与对照组相比,显着提高了 2-细胞向4-细胞过渡率（P<0.05）及囊胚率（P<0.05）。同时谷氨酸显着降低了 2-细胞期、4-细胞期及囊胚期胚胎内的活性氧含量（P<0.05）,并显着提高了 2-细胞期、4-细胞期及囊胚期胚胎内的谷胱甘肽水平和线粒体膜电位水平（P<0.05）。在小鼠早期胚胎培养中添加谷氨酸后,2-细胞、4-细胞胚胎内谷胱甘肽相关酶（GPx1、GPx2）、Nrf2及其相关基因（HO-1、GCLC、CAT、SOD1）的mRNA表达上调。此外,还提高了 2-细胞期细胞周期相关基因（cyclin B、CDK1）的mRNA表达。这些结果表明,谷氨酸通过降低小鼠早期胚胎氧化应激水平和改善线粒体水平提高了抗氧化水平进而有效降低胚胎发育阻滞的风险,提高了胚胎发育能力。
王涛[2]（2020）在《KDM4A和GSK126对猪克隆胚胎的体细胞重编程及体外发育潜能影响的研究》文中进行了进一步梳理动物克隆技术在加快猪的种质遗传改良、建立人类疾病动物模型和异种器官移植等方面具有巨大优势,这使猪成为生物医学领域的热点模式动物,但是猪克隆的效率非常低下,相关实验材料成熟卵子无法大量获取,而且克隆技术体系掌握不易且仍有待继续完善改进,这极大地限制了猪克隆技术的生产应用。目前,在小鼠上已有报道证实克隆胚胎发育过程中的合子基因组激活（Zygotic Genome Activation,ZGA）异常是导致克隆效率低下的主要原因之一,然而,有关猪克隆胚胎ZGA的情况还不清楚,因此继续深入探究猪克隆胚胎在ZGA时期转录及表观遗传模式的异常,并以此为切入点寻找提高猪克隆效率的有效方法具有十分重要的意义。本研究通过比较猪正常体内受精胚胎和克隆胚胎在转录水平以及表观修饰上的差异,发现组蛋白修饰H3K9me3和H3K27me3大量富集导致了异常的ZGA,本研究提供了一种通过H3K27me3编写酶的抑制剂GSK126和过表达KDM4A提高猪克隆胚胎的体细胞重编程及体外发育潜能的有效策略,有助于进一步推进猪克隆胚胎的临床应用。此外,猪克隆胚胎构建所需的成熟卵子长时间暴露于体外环境下会遭受严重的氧化应激伤害,导致体外老化（In Vitro Aging,IVA）。鉴于褪黑素具有高效的抗氧化应激作用,而其在猪卵子IVA上的研究甚少,因此我们希望通过探究褪黑素对缓解猪卵子IVA的作用机理寻找有效方法提高猪IVA卵子的质量,为后续获得高质量的克隆胚胎提供强有力的支持。具体结果如下:1)猪克隆胚胎的发育存在ZGA延迟现象,并且在ZGA时期存在异常的转录谱,部分ZGA起始基因激活失败,还有部分供体细胞基因未能被成功转录抑制,这些异常都与猪克隆胚胎的重编程效率低下密切相关。2)猪4细胞期克隆胚胎的基因组重编程抗拒区（Reprogramming-Resistant Regions,RRRs）和记忆保留区（Memory-Preserved Regions,MPRs）上均富集有高水平的H3K9me3和H3K27me3修饰,导致克隆胚胎ZGA时期基因表达异常,说明H3K9me3和H3K27me3修饰的异常富集是猪ZGA时期重编程的主要障碍。3)猪克隆胚胎中的H3K4me3修饰在RRR和MPR上较少富集,并不是主要的体细胞重编程障碍。此外,猪4细胞期克隆胚胎RRR和MPR上较少富集蛋白编码基因,但是富集了很多重复序列如LINE和LTR,说明RRR和MPR主要分布在开放程度较低的异染色质区域。4)联合注射KDM4A和KDM6A两种m RNA能有效擦除4细胞期克隆胚胎中的H3K9me3和H3K27me3修饰,过表达KDM4A能够显着提高克隆胚胎的体外发育潜能,但过表达KDM6A对克隆胚胎的体外发育潜能没有促进作用。5)通过KDM4A m RNA注射联合GSK126处理48 h后,能有效擦除猪4细胞期克隆胚胎中的H3K9me3和H3K27me3修饰,10个ZGA相关基因的表达量显着提高,而且克隆胚胎的体外发育潜能也得到了进一步提升,说明过表达KDM4A和GSK126联合处理对于促进猪克隆胚胎的发育潜能具有较好的协同作用。6)褪黑素能够通过维持形态正常、缓解氧化应激水平、降低自噬及早期凋亡水平和维持线粒体膜电位稳定来提高体外老化卵子的质量,进而显着提高其胚胎发育潜能。
郭庆[3]（2019）在《黄芩苷对猪卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育能力的影响》文中研究指明黄芩苷（baicalin）是一种从黄芩植物根部提取的传统中药单体,因其具有抗氧化、抗凋亡、抗炎症等功能,被用于治疗多种由炎症因子引起的疾病,同时在生殖上具有治疗不孕不育,保胎的作用。然而,baicalin对于卵母细胞体外成熟（IVM）,胚胎体外发育的影响及其机制尚不清楚。卵母细胞IVM和胚胎体外培养会受到高浓度活性氧（ROS）的破坏作用使其效率降低,这使卵母细胞和胚胎相关机理的研究及二者在辅助生殖技术上的应用都受到很大限制。因此本实验在猪卵母细胞IVM培养液和胚胎IVC培养液中添加baicalin可以通过抑制凋亡显着提高卵母细胞IVM能力、卵母细胞质量、胚胎体外发育能力、胚胎质量。同时,利用成年雄性昆明鼠体内实验验证baicalin对酒精诱导精子损伤的保护作用。一、Baicalin对猪卵母细胞IVM及其后胚胎体外发育能力的影响1.本实验探索不同浓度的baicalin对猪卵母细胞IVM能力的影响,发现0.1μg/mL和0.5 μg/mL的baicalin均可以显着的提高猪卵母细胞IVM 能力（68.1,70.2 vs.59.7;P<0.05）。Baicalin 具有显着的抗氧化能力,因此,通过荧光染色的方法发现0.05,0.1和0.5μg/mL baicalin处理组中卵母细胞内产生活性氧（ROS）水平均显着的低于对照组（P<0.05）。在最小试验药物浓度获得最佳实验效果的原则下,后续实验选择0.1 μg/mL的baicalin作为最佳处理浓度。同时RT-PCR结果显示baicalin处理组中卵母细胞和卵丘细胞的促凋亡相关基因（Bax）mRNA表达量显着低于对照组（P<0.05）。2.荧光染色和RT-PCR方法进一步检测baicain处理后卵母细胞的质量,结果显示0.1μg/mL的baicalin处理组中线粒体潜能性（△Ψm）和ATP含量均显着的高于对照组（P<0.05）。同时,RT-PCR检测到baicalin处理组中卵母细胞成熟相关基因（BMP15,GDF9,CyclinB,CDK1）和卵丘细胞扩增相关基因（PTGS1,PTX3,TNFIP6,SHAS2）的mRNA表达量显着的高于对照组（P<0.05）。3.检测baicalin处理的卵母细胞经孤雌激活（PA）后胚胎的体外发育能力。结果显示处理组获得的胚胎体外发育能力显着的高于对照组（49.5 vs.27.2;P<0.05）。同时,baicalin处理后获得的胚胎发育到囊胚阶段时细胞数也显着的高于对照组（P<0.05）。RT-PCR检测到baicalin处理组中胚胎达到囊胚阶段时全能性相关基因（Nanog,Sox2）和Bcl2基因的mRNA表达量显着的高于对照组（P<0.05）,而Ba基因mRNA表达量显着的低于对照组（P<0.05）。同时,Tunel染色发现baicalin处理组囊胚细胞凋亡数显着的低于对照组（P<0.05）。二、Baicalin对PA,体细胞核移植（SCNT）和体外受精（IVF）胚胎发育能力的影响1.检测baicalin对猪PA胚胎体外发育能力的影响。结果表明0.1μg/mL的baicalin处理可以显着提高猪PA胚胎的体外发育能力（21.7 vs.36.7;P<0.05）,囊胚细胞数也显着高于对照组（P<0.05）。Tunel染色检测了囊胚的质量,结果显示baicalin处理组囊胚凋亡细胞数显着的低于对照组（P<0.05）。RT-PCR结果表明全能性基因（Oct4,Sox2）的mRNA表达量显着高于对照组（P<0.05）。Bax和Bcl2基因的mRNA表达量显着低于和高于对照组（P<0.05）。2.检测baicalin对猪PA胚胎ROS表达量,Bax和Bcl2基因mRNA表达量,△Ψm,ATP含量的影响。利用荧光染色检测0.1μg/mL baicalin处理对猪PA胚胎质量的影响,结果显示baicalin处理组2/4-cell时期ROS的表达量显着低于对照组和其他浓度处理组（P<0.05）。同时RT-PCR结果显示胚胎在2/4-cell时期Bax基因的mRNA表达量均显着的低于对照组（P<0.05）,Bcl2基因在2-cell时期的mRNA表达没有显着的变化,而在4-cell时期mRNA的表达量显着高于对照组（P<0.05）。同时,荧光染色显示baicalin处理组中△Ψm和ATP含量显着高于对照组（P<0.05）。3.检测baicalin处理对猪PA胚胎中sonic hedgehog（SHH）信号途径的影响。RT-PCR结果显示,baicalin处理组中SHH信号途径相关基因（SHH,PTCH1,GdI1,SMO）的mRNA表达量均显着高于对照组（P<0.05）。免疫荧光染色检测发现baicalin处理可以显着的提高SHH信号途径相关蛋白（SHH,GLI1）的表达量。为了进一步检测baicalin处理对胚胎体外发育能力影响的机制,我们将胚胎分为三个组:对照组;baicalin处理组;baicalin和SHH信号抑制剂（Cyclopamine,Cy）共同处理组,结果显示Cy可以恢复baicalin对胚胎产生ROS和凋亡的抑制作用及baicalin对△Ψm和ATP含量的增加。最后,我们检测三个处理组胚胎的体外发育能力,结果显示Cy可以抑制baicalin对胚胎体外发育能力的提高。4.检测0.1 μg/mL baicalin对猪SCNT和IVF胚胎的影响。结果表明0.1 μg/mL的biacalin可以显着提高猪SCNT和IVF胚胎的发育能力（14.9 vs.25.9;14.9 vs.25.9;P<0.05）。三、Baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠精子损伤的保护作用1.本实验建立了酒精诱导成年雄性昆明鼠精子损伤模型。实验分为两组,10只同窝出生,表型一致的成年雄性昆明鼠随机分为实验组和对照组,每组各5只。实验组进行每天连续四周酒精灌胃实验,灌胃剂量按酒精质量和小鼠体重比如下:第一周每天2g/kg、第二周每天4g/kg、第三周每天6 g/kg、第四周每天8 g/kg、对照组饲喂等量的生理盐水。第四周结束时对小鼠进行剖检,检测到小鼠体重下降,死亡率增加,精子密度显着的低于对照组（P<0.05）。2.检测不同浓度baicalin处理对酒精诱导成年雄性小鼠精子损伤的保护作用。实验分为对照组（等量生理盐水）、酒精组、酒精和25 mg/kg baicalin共同处理组、酒精和50 mg/kg baicalin共同处理组（mg/kg即baicalin重量和小鼠体重比值,酒精剂量按照实验一）。结果显示,50 mg/kg的biacalin灌胃量对酒精诱导的小鼠精子密度下降和精子畸形率升高等具有部分保护作用（P<0.05）。3.检测不同浓度baicalin对酒精诱导的成年雄性昆明鼠睾丸组织凋亡和炎症因子相关基因mRNA表达量的影响。结果显示,酒精处理会显着的增加睾丸组织中凋亡基因（Caspse3,Bax）和炎症因子（IL-6,TNF-a）mRNA表达量,同时降低Bcl2基因mRNA的表达量（P<0.05）。相比于酒精组,50 mg/kg的biacalin处理可以显着降低caspase3,Bax,IL-6,TNF-a基因的mRNA表达量,同时提高Bcl2基因的mRNA表达量（P<0.05）。结论:本研究确定了 0.1 μg/mL baicalin可以显着提高猪卵母细胞IVM和PA,IVF及SCNT胚胎体外发育能力。主要表现为降低卵母细胞和胚胎中ROS水平,提高△Ψm和ATP含量等。同时证明baicalin是通过激活SHH信号途径来影响猪胚胎体外发育潜能。此外,本研究也进一步利用体内实验证明了 baicalin对酒精诱导雄性昆明鼠精子损伤具有潜在的保护作用。
刘宇[4]（2019）在《谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞及相关基因表达影响的研究》文中认为哺乳动物胚胎体外培养体系处于次优化水平,胚胎常面临发育迟缓的风险。活性氧（Reactive oxygen species,ROS）物质生产与清除能力的失衡,将导致小鼠胚胎2-细胞期发育阻滞等问题。本论文想要从发育阻滞的分子层面进行研究,旨在探究谷氨酸在小鼠MZT期胚胎体外培养过程中能否起到克服发育阻滞的作用,以期为从根本上解决因发育阻滞导致的低生产率等问题提供一定理论基础。本试验设计了两个不同的试验组（谷氨酸处理组,M16对照组）,通过对发育阻滞品系昆明小鼠2-细胞早期、2-细胞中期及2-细胞晚期时期的胚胎进行对比,利用DCFH-DA测定小鼠胚胎内部活性氧含量,利用CMF2HC测定小鼠胚胎内部GSH含量,最后对GPx基因即GPx1,4和ZGA标记基因即Eif-1α,Muervl,Zscan4d和Hsp70.1的mRNA表达水平进行分析检测。试验结果表明:1、6mmol/L谷氨酸处理组小鼠MZT期胚胎的2-细胞向4-细胞过渡率,显着高于M16对照组和其余各浓度谷氨酸处理组;2、谷氨酸处理组小鼠MZT各时期胚胎内ROS和GSH含量均无显着差异,其中ROS水平显着低于M16对照组,GSH水平均显着高于M16对照组;3、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内各GPx基因表达上调;4、谷氨酸处理组诱导小鼠MZT期胚胎内ZGA标记基因表达上调,尤其在MZT中期和晚期显着升高;综上所述,浓度为6mmol/L谷氨酸可通过刺激GPx1和GPx4酶活性维持GSH与ROS含量动态平衡,间接参与清除ROS的抗氧化过程;通过提高ZGA标记基因表达水平及维持其时序性高表达模式,直接参与ZGA启动过程;最终有效降低发育阻滞风险,确保MZT顺利完成。
罗肇博[5]（2019）在《RepSox和LBH589联合处理对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响》文中指出体细胞核移植胚胎在体外发育时,因为供体细胞核过低多能性及异常表观重编程而出现胚胎发育阻滞现象。继而导致体细胞克隆胚胎发育异常和哺乳动物体细胞核移植效率低下。目前关于同时提高胚胎发育的多能性和表观遗重编程能力少有研究。RepSox是在诱导多能干细胞中发现的一种可以促进细胞产生多能性的小分子化合物。本实验的目的是结合RepSox和组蛋白去乙酰化抑制剂处理猪体细胞克隆胚胎,提高胚胎发育多能性的同时又改善表观遗传修饰,从而提高猪体细胞克隆胚胎体外发育能力及克隆效率。通过分析早期胚胎体外发育能力筛选出最佳的去乙酰化抑制剂及RepSox的最佳处理浓度。通过检测早期胚胎不同发育时期多能性基因的表达情况,分析胚胎发育的全能性;通过免疫荧光染色检测早期胚胎乙酰化和甲基化水平,判断其表观重编程能力;并通过凋亡染色确定胚胎质量。本实验得到以下分析结果:1.50nmol/LLBH589处理24小时组体外发育能力显着高于5 μmoI/LM344处理6小时组、0.2μmol/L MGCD0103处理6小时组、2mmol/L VPA处理24小时组和对照组（P<0.05）。2.不同浓度RepSox处理猪体细胞克隆胚胎,12.5、25 μmol/L组2-细胞率、4-细胞率、囊胚率、囊胚平均细胞数和对照组没有显着性差异,但显着高于50、100μmol/L 处理组（P<0.05）。3.12.5 μmol/L RepSox和50 nmol/L LBH589共处理胚胎体外发育能力显着高于对照组,多能性基因NANOG、POU5FI、SOX2表达量在4-细胞期、囊胚期显着高于对照组和LBH589处理组,且共处理组表观重编程水平优于对照组和LBH589处理组。结论:RepSox和LBH589共处理可以提高猪体细胞克隆胚胎早期发育能力和胚胎质量,提高多能性基因的表达及表观重编程水平。
邓明田[6]（2018）在《LncRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究》文中指出哺乳动物合子基因组激活（Zygotic genome activation,ZGA）过程中合成大量新蛋白,接替母源物质调控早期胚胎发育。体细胞核移植（Somatic cell nuclear transfer,SCNT）胚胎发育过程中,合子基因组激活异常,导致核移植胚胎发育阻滞在ZGA时期。研究表明长链非编码RNA（Long noncoding RNA,lncRNA）参与调控合子基因组激活。但山羊胚胎ZGA时期尚不明确,lncRNA保守性较差,同时lncRNA参与调控核移植胚胎重编程的研究也鲜有报道。因此,本研究以山羊胚胎为试验材料,探究lncRNA调控山羊ZGA期核移植胚胎重编程的机制。本研究主要分为以下四部分:试验一、山羊ZGA期差异表达mRNA和lncRNA的研究本试验旨在确定山羊合子基因组激活期,并筛选鉴定影响山羊合子基因组激活的mRNA和lncRNA。首先,利用体外培养试验和免疫荧光的方法确定山羊合子基因组激活期。其次,使用单细胞转录组测序技术分析山羊ZGA过程中mRNA和lncRNA的表达变化。最后,利用显微注射siRNA（Smallinterfering RNA）的方法研究干扰lncRNA对山羊早期胚胎发育的影响。结果显示:（1）在体外培养试验和20 μg/ml α-鹅膏菌素（α-amanitin）处理试验中,山羊胚胎出现8细胞期阻滞现象;同时,RNA聚合酶Ⅱ在8细胞期胚胎中高表达。（2）与4细胞期胚胎相比,8细胞期胚胎中有800个mRNA和250个lncRNA差异表达。（3）差异表达mRNAKdm4d与H3K9me3有关,在8细胞期胚胎中表达水平显着升高;H3K9me3在山羊胚胎ZGA过程中动态变化,在8细胞期胚胎中几乎不表达,但在发育阻滞的8细胞期胚胎中高表达。（4）差异表达lncRNA lnc1178、lnc137和lnc3263均靶向作用于多个差异表达的转录因子,因此选作功能性lncRNA;分别干扰lnc1178、lnc137和lnc3263在山羊合子中的表达,发现干扰lnc137的山羊胚胎中,嚢胚率显着降低（19.4±0.44%Vs.75±2.89%,P<0.01）。（5）干扰lnc137显着降低8细胞胚胎中合子基因CXCL6、EIF-1A和HSP70.1的表达水平（P<0.01）,并上调母源基因GDF9（P<0.01）的表达水平。以上结果表明,山羊合子基因组激活发生在8细胞期;在山羊合子基因组激活过程中,mRNA和lncRNA动态变化;LncRNA lnc137可能通过促进母源基因降解和合子基因表达,影响山羊早期胚胎发育。试验二、山羊核移植胚胎ZGA期差异表达mRNA的研究SCNT胚胎中普遍存在异常的合子基因组激活。因此,本试验利用单细胞转录组测序技术分析山羊核移植胚胎ZGA期mRNA的表达变化。其次,分析组蛋白甲基化修饰相关基因和组蛋白修饰H3K4me3在核移植胚胎发育过程中的变化。最后,利用显微注射技术分析差异表达mRNA对核移植胚胎体外发育的影响。结果显示:（1）与8细胞期单精子胞质注射（Intracytoplasmic sperm injection,ICSI）胚胎相比,8细胞期核移植胚胎中,813个mRNA表达水平显着升高,235个mRNA表达水平显着降低。（2）H3K4me3去甲基化基因Kdm5a（P<0.01）和Kd5b（P<0.05）在8细胞期山羊核移植胚胎中表达水平显着降低。（3）组蛋白甲基化修饰H3K4me3在山羊ICSI胚胎合子基因组激活过程中逐渐降低,在ICSI囊胚中消失,但在8细胞期核移植胚胎中H3K4me3修饰水平仍然较高。（4）注射Kdm5b mRNA可有效移除8细胞期核移植胚胎中的H3K4me3修饰,并显着提高山羊核移植胚胎囊胚率（47.91±0.86%Vs.17.67±3.1%,P<0.01）;干扰Kdm5b导致8细胞期核移植胚胎中H3K4me3水平仍然较高,核移植胚胎发育受阻。以上结果表明,山羊核移植胚胎合子基因组激活异常,且存在异常高水平的H3K4me3修饰;Kdm5b可促进体细胞核移植胚胎重编程。本试验为探究体细胞核移植胚胎重编程机制及提高山羊核移植胚胎体外发育能力提供了理论参考。试验三、LncRNA调控山羊核移植胚胎重编程的研究LncRNA参与调控哺乳动物早期胚胎发育,但其对核移植胚胎重编程的作用鲜有报道。因此,本试验旨在筛选影响山羊核移植胚胎合子基因组激活期重编程的lncRNA,并阐述其调控核移植胚胎重编程的潜在机制。首先,利用单细胞转录组测序技术筛选山羊核移植胚胎合子基因组激活过程中差异表达的lncRNA。其次,以Kdm5b作为靶基因筛选功能性lncRNA,并初步验证Kdm5b和靶基因关系。最后,利用显微注射技术研究lncRNA对山羊核移植胚胎早期发育的影响,并阐述其影响核移植胚胎重编程的机制。结果显示:（1）与4细胞期核移植胚胎相比,8细胞期核移植胚胎中共有159个lncRNA差异表达,其中131个lncRNA表达水平显着升高,28个lncRNA表达水平显着降低。（2）以Kdm5b作为靶基因,筛选得到18个候选lncRNA,其中lnc3712受Kdm5b影响最为显着,因此选择lnc3712进行后续研究。（3）干扰lnc3712的山羊核移植胚胎,囊胚率显着升高（45.94±1.3%Vs.17.67±3.1%,P<0.01）。（4）在干扰lnc3712的8细胞期山羊核移植胚胎中,700个mRNA表达水平升高,其中合子基因BTG3、UBE2M、UBE2S、EIF3G、BTG1和HSFl等表达水平显着升高（P<0.05）;同时,转录因子ABTB1、GATA2和TEAD4等表达水平显着升高（P<0.01）,而母源基因WEE2和GDF9表达水平显着降低（P<0.01）。（5）干扰lnc3712的8细胞期山羊核移植胚胎中,Kdm5b表达水平显着升高（P<0.05）,组蛋白甲基化修饰H3K4me3消失;同时,在干扰lnc3712的核移植胚胎囊胚期H3K27me3重新出现。以上结果表明,lncRNA在山羊核移植胚胎合子基因组激活过程中动态变化;干扰lnc 3712可促进合子基因表达和基因组转录,并促进Kdm5b表达,提高体细胞核移植胚胎重编程效率。本试验鉴定得到一个参与调控山羊核移植重编程的新lncRNA,丰富了 lncRNA调控核移植重编程的研究内容,同时为研究lncRNA调控核移植重编程提供了理论依据。试验四、核移植胚胎及克隆山羊Xist启动子甲基化状态的研究LncRNA Xist对XCI的建立极为重要,但山羊基因组中Xist序列未知,而且有关Xist的研究在克隆山羊中也鲜有报道。因此,本试验分析ZGA期核移植胚胎和克隆山羊耳、肺脏和脑组织中Xist表达水平及启动子甲基化状态的变化。首先,本研究扩增了山羊Xist基因的启动子序列,并利用MethPrimer预测其差异甲基化区域（Differentially methylated region,DMR）。其次,利用亚硫酸盐测序（Bisulfite sequencing PCR,BSP）分析ZGA期山羊核移植胚胎及死亡克隆山羊耳、肺脏和脑组织中Xist启动子甲基化水平并利用荧光定量PCR分析Xist及X染色体相关基因的表达水平。结果显示:（1）预测的XistDMR在精子、卵母细胞、雌性成纤维细胞和雄性肺脏组织中甲基化水平不同,是差异甲基化区域。（2）在山羊8细胞期核移植胚胎中,Xist甲基化水平显着高于ICSI同时期胚胎。（3）在雌性死亡克隆山羊耳、肺脏和脑组织中,Xist启动子甲基化水平显着升高（P<0.01）。但在雄性死亡克隆山羊耳、肺脏和脑组织中及存活克隆山羊耳组织中,Xist DMR甲基化水平无显着改变。（4）在山羊8细胞期核移植胚胎中,Xist表达水平无显着差异,但在雌性死亡克隆山羊耳、肺脏和脑组织中,Xist表达水平显着降低（P<0.01）。以上结果表明,山羊核移植胚胎ZGA期和雌性死亡克隆山羊中Xist甲基化水平异常升高。通过以上试验,本研究证实了山羊ZGA发生在8细胞期。在山羊胚胎ZGA过程中,800个mRNA和250个lncRNA差异表达,干扰lnc137影响山羊早期胚胎发育。在山羊核移植胚胎发育过程中,合子基因组激活异常。过表达Kdm5b或干扰lnc3712均显着提高核移植胚胎体外发育能力;特别是lnc3712可能通过Kdm5b调控山羊核移植胚胎重编程。本研究丰富了 lncRNA调控核移植重编程的研究内容,同时为探究体细胞核移植重编程机制及提高山羊核移植胚胎体外发育能力提供了理论参考。
阿拉法特·阿木拉提[7]（2017）在《培养液中添加虾青素对小鼠早期胚胎发育的影响》文中进行了进一步梳理虾青素作为一种抗氧化剂在许多领域被广泛使用。虾青素的形态和功能有很多种,不但能够消除自由基而且可以防止由其引起的化学反应。目前,虾青素抗氧化作用的实验研究,大多集中于食品、保健品、药品以及作为饲料添加剂的研究,而针对胚胎体外发育的研究报道相对较少。因此试验选用23-25 g的ICR系雌性小鼠,研究添加不同浓度的虾青素对提高卵裂率和囊胚率的影响,利用实时荧光PCR技术检测TGF-β和Bcl-2基因的表达量。试验研究结果如下:（1）体外发育培养液中添加不同浓度的虾青素,培养96 h后,在虾青素浓度为5μmol/L、10μmol/L时,卵裂率都是升高的,其中10μmol/L组卵裂率显着高于0μmol/L组和5μmol/L组（P<0.05）;但是50μmol/L组的卵裂率显着低于0μmol/L组（P<0.05）,极显着地低于5μmol/L组和10μmol/L组（P<0.01）;结果表明,发育培养液中添加10μmol/L的虾青素能显着提高卵裂率,但添加50μmol/L虾青素显着降低卵裂率。从囊胚发育率情况看,虾青素10μmol/L组的胚胎囊胚率显着地高于0μmol/L组和25μmol/L（P<0.05）,极显着地高于50μmol/L组（P<0.01）;50μmol/L组囊胚率显着低于0μmol/L、5μmol/L组及25μmol/L组,由此说明,添加10μmol/L的虾青素可以显着提高胚胎的囊胚发育率,但添加浓度达到50μmol/L时,能显着降低胚胎的囊胚发育率。（2）0μmol/L试验组与5μmol/L试验组在2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚和囊胚各发育阶段的形成率无显着性差异（P>0.05）;与10μmol/L试验组相比其2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚形成率显着降低（P<0.05）;与25μmol/L试验组比较后发现在各发育阶段均不显着（P>0.05）;与50μmol/L试验组之间在2-细胞、4-细胞、8-细胞阶段呈差异显着（P<0.05）,但在桑椹胚和囊胚阶段呈差异极显着（P<0.01）。添加虾青素的各试验组之间相互比较后我们发现5μmol/L试验组和10μmol/L试验组之间无差异显着（P>0.05）,但与50μmol/L试验组在各阶段均呈差异极显着（P<0.01）;5μmol/L试验组与25μmol/L试验组相比在个阶段均呈差异不显着（P>0.05）,10μmol/L试验组与25μmol/L试验组相比在2-细胞、4-细胞和桑椹胚阶段呈差异极显着（P<0.01）,但在囊胚阶段呈现差异显着（P<0.05）;25μmol/L试验组和50μmol/L试验组之间在2-细胞和4-细胞阶段差异不显着（P>0.05）但在8-细胞、桑椹胚和囊胚阶段呈差异显着（P<0.05）。结果表明,不同浓度的虾青素对个阶段的发育都有影响,其中10μmol/L的添加浓度可显着提高2-细胞、桑椹胚和囊胚的形成,提高体外受精胚胎发育。（3）囊胚细胞数是体外受精后各组胚胎96 h的细胞数,0-10μmol/L浓度间,随着添加浓度的增加,囊胚细胞数随之增加,10μmol/L组与0μmol/L组相比其囊胚细胞数呈现统计学差异（P<0.05）。当虾青素添加浓度进一步增加时,25μmol/L组和50μmol/L组囊胚细胞数反而低于10μmol/L组,但高于0μmol/L组,表明随着虾青素浓度的升高,可能呈现一定的毒性效应,降低了胚胎的细胞数。结果显示,虾青素的添加浓度为10μmol/L时囊胚细胞数明显提高。（4）分别提取了5个不同浓度条件下各组囊胚的总RNA,并以β-actin为内参基因,检测了TGF-β和Bcl-2基因的mRNA表达量。0μmol/L组TGF-β的表达量分别与10μmol/L组和50μmol/L组的TGF-β表达量比较,10μmol/L组TGF-β的表达量极显着高于0μmol/L组和50μmol/L组（P<0.01）,0μmol/L组和50μmol/L组表达量差异不显着。以0μmol/L组Bcl-2的表达量设为1,分别比较10μmol/L组和50μmol/L组Bcl-2的表达量,50μmol/L组Bcl-2的表达量极显着高于0μmol/L组和10μmol/L组（P<0.01）,0μmol/L组和10μmol/L组表达量差异不显着。综上所述,在发育培养液中添加10μmol/L虾青素可以促进胚胎的发育,能显着地提高小鼠受精卵的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数;在发育培养液中添加10μmol/L虾青素能显着提高小鼠受精卵体外发育TGF-β基因表达量的水平;50μmol/L的添加量使Bcl-2基因表达量的水平升高。
胡德宝[8]（2016）在《ROS诱发P53介导的信号通路对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响》文中进行了进一步梳理近年来,胚胎移植技术、胚胎分割技术、胚胎干细胞工程等极大地促进畜牧业的发展,而这些新技术的应用却受到的胚胎来源的制约。胚胎在体外发育过程中,常常会发生阻滞现象,潜在的机制迄今还未明了。ROS是生物体内产生的超氧阴离子（O2-）、过氧化氢（H2O2）、羟自由基（·OH）等活性含氧化合物的总称。课题组前期研究表明,胚胎在体外培养过程中,会产生ROS导致胚胎氧化应激现象,但其详细的作用机理还不明确。肿瘤抑制蛋白P53作为一种细胞周期和细胞凋亡的调控者,与氧化应激反应具有密切关联,但其在胚胎中所起的作用知之甚少。所以我们假设P53在胚胎体外发育过程中在发生氧化应激时扮演重要作用,围绕ROS与P53之间的信号通路的调控作用,深入探讨ROS引起小鼠胚胎体外发育阻滞现象的机制。为此,本研究做了以下方面的实验：实验一、过氧化氢诱导的胚胎氧化应激反应首先探讨不同浓度的过氧化氢以及不同浓度抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）对胚胎发育的影响,筛选出本实验最佳的胚胎氧化应激模型为后续实验做准备。结果表明,随着过氧化氢浓度的增加（25μM、50μM、100μM）胚胎4细胞发育率、囊胚率显着性降低（p<0.05）,从中优选出50μM/L的过氧化氢为最佳应激浓度,且在添加不同浓度（1mM、5mM、25mM）的NAC实验中,5mM时4细胞率、囊胚率显着高于其他组（p<0.05）,确定了5mM为最佳抗氧化浓度。观察胚胎内部ROS水平发现,过氧化氢能显着性增加胚胎内部ROS水平,添加NAC能显着降低胚胎中ROS水平。同时,本实验结合PI染色,发现过氧化氢刺激的胚胎PI染色相对其他组较高。为进一步评估氧化损伤程度,对脂质过氧化产物MDA测定发现,过氧化氢刺激的胚胎MDA含量显着性升高。因此,证明了一定浓度的H2O2能够引起胚胎氧化应激,导致ROS升高、MDA表达增加的胚胎发育阻滞现象。实验二、ROS诱导P53信号通路对胚胎发育的影响实验主要探讨应激后的胚胎ROS是如何调控P53及其相关信号通路的变化引起阻滞现象发生。实验结果表明,过氧化氢能够导致P53基因表达上调,细胞周期相关基因cdc2、CDK4、CDK6下调,尤其是cdc2基因显着性的降低（p<0.05）,而且在蛋白水平上也发现H2O2能够引起P53-ser15磷酸化蛋白表达升高以及相应的P53蛋白高表达；为了进一步探讨ROS引起的相关基因变化是由P53介导发生,通过抑制剂PFT-α干扰P53表达,结果发现,在P53基因、P53-ser15磷酸化蛋白和P53蛋白表达显着性抑制后,GADD45、P21基因的nRNA表达水平显着性下调,而细胞周期基因cdc2的表达显着性高于对照组与过氧化氢组（p<0.05）,暗示出在抑制P53表达后,相关检验点基因与细胞周期基因的表达与抑制前相比发生了明显相反改变,因此ROS引起的胚胎发育阻滞现象可能是通过氧化应激诱导P53介导的信号通路诱发的。实验三、P53在早期胚胎中的氧化还原作用本章实验继续从氧化酶的角度,更深入讨论的P53对早期胚胎体外发育的调控。实验首先观察了抑制P53的表达对胚胎内ROS水平的影响,其后测定了不同处理下对抗氧化酶和促氧化酶的基因mRNA、蛋白表达的影响,来观察P53对胚胎内氧化还原系统的影响。结果表明,抑制P53表达会增加ROS含量,抑制抗氧化酶SOD、GPX等表达。在无应激胚胎中低水平P53可以增加抗氧化酶SOD、GPX等表达,对促氧化酶BAX、PUMA等表达无影响。在胚胎受到氧化应激时,会诱导高水平P53表达,抑制抗氧化酶SOD、GPX等表达,增加促氧化酶BAX、PUMA等表达。综上所述：本实验结果表明ROS可以诱导体外发育的早期胚胎发生氧化应激现象,导致胚胎内脂质过氧化、胚胎发育受阻等现象的发生。ROS导致胚胎应激,可以诱导P53的高表达,从而刺激其下游控制检验点基因GADD45a、P21的表达来降低细胞周期进程相关基因cdc2、CDK4的表达,导致细胞发生阻滞现象。为了验证这种关系,对P53进行了抑制实验,充分证明了以上结果。此外,在对抗氧化酶与促氧化酶的研究中发现,P53可以根据其表达水平高低,来进行抗氧化酶SOD、GPX、SESN2和促氧化酶BAX、PUMA等的调控。综上所述,本实验结果揭示了ROS可通过调节P53信号通路方式对体外发育的早期胚胎产生影响。
施超[9]（2016）在《TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究》文中进行了进一步梳理目的小鼠是生命科学研究最常用的模型动物,小鼠早期胚胎体外发育技术在许多的领域都起着重要的作用,比如发育生物学,胚胎移植等。小鼠早期胚胎体外发育阻滞,是实验研究中经常遇到的问题。KSOM等一些培养液在许多实验中被证实对突破早期胚胎发育有着积极的作用,但是囊胚移植后的成熟率低成为了普遍存在的问题。TSA（Trichostatin A）,具有抑制真菌作用的化合物。很多实验已经证明了使用TSA处理过的动物早期胚胎,核移植后胚胎的发育率都有明显升高,原因是TSA通过抑制去乙酰化酶的活性来提高组蛋白的乙酰化程度,促进表观遗传重编程。所以,在本次实验中使用TSA对小鼠早期胚胎进行处理,观察其在体外发育的过程和变化,探讨TSA对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法（1）超数排卵:C57BL/6小鼠,3-4周龄,雌性,SPF级,PMSG10 IU/只腹腔给药,48h后hCG 10 IU/只腹腔给药,致超数排卵,15H后收集小鼠的卵母细胞。（2）孤雌胚的建立:根据文献资料以KSOM为培养液,使用不同参数的电激活卵母细胞并培养24H,观察记录卵裂率和囊胚率。从而确定合适的电激活参数。（3）在KSOM中添加浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA分别培养12H和24H,之后观察和记录24H以及第6天的卵裂率和囊胚率。（4）在显微镜下对2细胞期和囊胚期胚胎计数。通过数据分析说明TSA对小鼠的早期胚胎发育的作用。结果（1）通过4次重复性实验,最终确定孤雌胚的电激活参数为脉冲强度1.2Kv/cm,脉冲宽度100μs,时间间隔1s,脉冲次数2次。（2）通过4次重复实验,分别在KSOM中加入浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA。观察发现加入浓度为50μmol/L和100μmol/L的TSA培养12H,小鼠胚胎细胞发育到2细胞期和囊胚期的成功率都有所增加,但是差异不显着。结论在KSOM培养液中添加TSA处理小鼠早期胚胎12H和24H,实验结果发现观处理12H的能够提高胚胎的发育率和卵裂率,而处理24H的则会出现胚胎的发育率和卵裂率明显下降,这说明TSA作用时间过长可能会出现组蛋白的超乙酰化,对胚胎发育产生抑制作用。所以,50μmol/L的TSA处理12H有助于提高小鼠胚胎的体外发育率和卵裂率,但是差异不显着。
庄利利,胡德宝,蔡丽娟,张也,李钟淑,方南洙[10]（2013）在《输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育机理的探索》文中进行了进一步梳理为研究输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎发育质量及胚胎对共培养细胞活力和基因转录量的影响,探索输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育的机理,建立纯化的小鼠输卵管上皮细胞系并对合子进行共培养,用DCHFDA测定胚胎内部的H2O2含量,以MTT法测定输卵管上皮细胞活力,用RT-PCR检测CAT及GPX的转录状况。结果表明:1)共培养能够提高2-细胞早期、4-细胞期胚胎发育率（0.951 3%VS 0.903 3%,0.857 6%VS0.700 5%,P<0.05）和囊胚发育率（0.537 9%VS 0.573 3%,P>0.05）;2)2-细胞早期胚胎内部的H2O2含量显着降低（0.047 9VS 0.068 2,P<0.05）;3)Ⅰ和Ⅱ型阻滞胚胎的比例降低（0.158 3%VS 0.192 6%,0.213 3%VS0.433 9%,P>0.05）,Ⅲ型阻滞胚胎的比例提高（0.621 6%VS 0.373 3%,P<0.05）;4)共培养细胞活性上升（0.216 7VS 0.195 7,P>0.05）;5)CAT及GPX的转录量增加（1.202 0VS 0.984 9,1.310 1VS 0.998 3,P>0.05）。结果显示输卵管上皮细胞共培养通过增强自身的抗氧化能力,利用细胞-细胞间的相互作用降低胚胎细胞内部的活性氧,提高胚胎质量,促进胚胎发育。
二、哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生与克服（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生与克服（论文提纲范文）
（1）谷氨酸对体外培养小鼠胚胎阻滞阶段的抗氧化水平及后续发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 活性氧在早期胚胎发育中的影响 |
| 1.2 胚胎发育阻滞 |
| 1.3 胚胎抗氧化体系 |
| 1.4 本试验的研究目的及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 试剂及仪器 |
| 2.3 主要溶液配制 |
| 2.4 试验设计 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.6 数据统计分析 |
| 第三章 结果与分析 |
| 3.1 谷氨酸对小鼠体外培养胚胎发育的检测 |
| 3.2 小鼠胚胎阻滞阶段及囊胚胚胎内部GSH和ROS含量检测 |
| 3.3 线粒体膜电位的检测及量化分析 |
| 3.4 TUNEL的检测及量化分析 |
| 3.5 小鼠胚胎阻滞阶段胚胎内谷胱甘肽相关基因的表达分析 |
| 3.6 小鼠胚胎阻滞阶段胚胎内Nrf2及其相关基因的表达分析 |
| 3.7 小鼠胚胎阻滞阶段胚胎细胞周期相关基因的表达分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 谷氨酸提高小鼠早期胚胎发育率 |
| 4.2 谷氨酸对小鼠早期胚胎内部活性氧含量的影响 |
| 4.3 谷氨酸对小鼠早期胚胎内部谷胱甘肽含量的影响 |
| 4.4 谷氨酸对小鼠早期胚胎内部线粒体膜电位水平的影响 |
| 4.5 谷氨酸对小鼠囊胚细胞凋亡的影响 |
| 4.6 谷氨酸对小鼠2-细胞、4-细胞期氧化还原基因表达的影响 |
| 4.7 谷氨酸对小鼠2-细胞、4-细胞期细胞周期基因表达的影响 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）KDM4A和GSK126对猪克隆胚胎的体细胞重编程及体外发育潜能影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表(Abbreviation) |
| 1 前言 |
| 1.1 研究问题由来 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 动物克隆技术 |
| 1.2.2 合子基因组激活(ZGA) |
| 1.2.3 克隆胚胎的表观修饰重编程异常 |
| 1.2.4 提高克隆效率的策略 |
| 1.3 研究的目的和意义 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 |
| 2.2 猪卵母细胞体外成熟培养基制备 |
| 2.3 猪卵母细胞体外成熟培养 |
| 2.3.1 猪卵巢采集 |
| 2.3.2 卵丘-卵母细胞复合体（Cumulus-Oocyte-Complex，COC）挑拣及培养 |
| 2.3.3 配制Tyrode’s lactate-HEPES-PVA medium(TLH-PVA) |
| 2.4 猪体细胞核移植显微操作针制备 |
| 2.4.1 拉针 |
| 2.4.2 断针 |
| 2.4.3 磨针 |
| 2.4.4 洗针 |
| 2.4.5 拉尖 |
| 2.4.6 打弯 |
| 2.5 猪胎儿成纤维细胞(Porcine Fetus Fibroblast,PFF)培养 |
| 2.5.1 细胞培养基配制 |
| 2.5.2 PFF培养及SCNT前的处理 |
| 2.6 猪体细胞核移植 |
| 2.6.1 相关培养液配制 |
| 2.6.2 挑拣成熟卵 |
| 2.6.3 显微操作盘制备 |
| 2.6.4 去核——盲吸法 |
| 2.6.5 注核 |
| 2.6.6 电融合 |
| 2.7 孤雌激活 |
| 2.8 克隆胚胎mRNA注射 |
| 2.8.1 基因克隆 |
| 2.8.2 体外转录 |
| 2.8.3 克隆胚胎mRNA注射 |
| 2.9 卵子早期凋亡检测 |
| 2.10 ROS水平检测 |
| 2.11 线粒体膜电位水平检测 |
| 2.12 谷胱甘肽(GSH)检测 |
| 2.13 TUNEL法检测凋亡细胞 |
| 2.14 免疫荧光染色 |
| 2.15 微量样品总RNA提取 |
| 2.16 cDNA第一链合成 |
| 2.17 实时定量PCR |
| 2.18 低细胞量RNA-seq |
| 2.19 PFF普通转录组测序 |
| 2.20 ULI-Ch IP-seq |
| 2.20.1 所需溶液配方 |
| 2.20.2 N-ChIP |
| 2.20.3 KAPA建库 |
| 2.21 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 测序样品质量检测 |
| 3.2 猪克隆胚胎pre-ZGA时期存在异常的基因转录 |
| 3.3 猪4细胞期克隆胚胎重编程抵抗区和记忆保留区的发掘 |
| 3.4 阻遏性组蛋白修饰H3K9me3和H3K27me3 是猪克隆胚胎pre-ZGA起始期的重编程障碍 |
| 3.5 猪4 细胞期克隆胚胎记忆保留区异常富集组蛋白修饰H3K9me3和H3K27me3 |
| 3.6 通过过表达KDM4A来促进猪的体细胞重编程 |
| 3.7 过表达KDM4A联合GSK126 处理进一步促进了猪克隆胚胎的发育潜能 |
| 3.8 褪黑素缓解卵子老化并促进胚胎发育 |
| 3.8.1 确定褪黑素处理体外老化卵子的最佳浓度 |
| 3.8.2 褪黑素提高体外老化卵子孤雌胚胎的发育能力 |
| 3.8.3 褪黑素缓解体外老化卵子的氧化应激水平 |
| 3.8.4 褪黑素降低体外老化卵子的早期凋亡水平 |
| 3.8.5 褪黑素延缓体外老化卵子线粒体膜电位降低 |
| 3.8.6 褪黑素降低体外老化卵子的自噬水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 克隆胚胎重编程不完全 |
| 4.2 异常组蛋白修饰H3K9me3和H3K27me3 是体细胞重编程的主要障碍 |
| 4.3 去除异常组蛋白修饰H3K9me3和H3K27me3 有利于克隆胚胎的体细胞重编程 |
| 4.4 技术革新和组合策略提高克隆重编程 |
| 4.5 褪黑素维持体外老化卵子质量并提高其胚胎发育潜能 |
| 5 小结 |
| 5.1 本研究的主要结果与结论 |
| 5.2 本研究的创新之处 |
| 5.3 本研究的不足之处及建议 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）黄芩苷对猪卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育能力的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章:绪论 |
| 1.1 Baicalin的研究进展 |
| 1.1.1 Baicalin在生殖上的应用 |
| 1.1.2 Baicalin在抗病毒和抗菌上的应用 |
| 1.1.3 Baicalin在保护组织上的应用 |
| 1.2 猪卵母细胞IVM的研究进展 |
| 1.2.1 卵母细胞IVM的意义 |
| 1.2.2 卵母细胞成熟过程 |
| 1.2.3 卵母细胞IVM的特征 |
| 1.2.4 卵母细胞IVM的影响因素 |
| 1.3 胚胎IVC的研究进展 |
| 1.3.1 哺乳动物胚胎的形成 |
| 1.3.2 哺乳动物孤雌生殖,IVF,SCNT |
| 1.3.3 影响胚胎IVC的因素 |
| 1.4 Sonic hedgehog (SHH)信号途径研究进展 |
| 1.4.1 SHH信号途径 |
| 1.4.2 SHH信号途径在组织生长修复上的应用 |
| 1.4.3 SHH信号途径在生殖上的作用 |
| 1.5 本实验的研究目的与意义 |
| 第二章:黄芩苷对猪卵母细胞IVM能力的影响 |
| 2.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要设备 |
| 2.1.3 培养液配方 |
| 2.1.4 猪卵巢获取 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 猪卵母细胞IVM及卵母细胞复合体处理 |
| 2.2.2 孤雌激活 |
| 2.2.3 Hoechst33342染色 |
| 2.2.4 ROS检测 |
| 2.2.5 线粒体潜能性(△Ψm)检测 |
| 2.2.6 ATP含量检测 |
| 2.2.7 RT-PCR |
| 2.2.8 TUNEL染色 |
| 2.2.9 实验设计 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 不同浓度baicalin对猪卵母细胞IVM能力的影响 |
| 2.3.2 不同浓度baicalin处理对猪卵母细胞内ROS表达量的影响 |
| 2.3.3 Baicalin处理对猪卵母细胞和卵丘细胞中凋亡相关基因表达量的影响 |
| 2.3.4 Baicalin处理对猪卵母细胞核成熟和卵丘细胞扩增相关基因表达量的影响 |
| 2.3.5 Baicalin处理对猪MII期卵母细胞内△Ψm和ATP含量的影响 |
| 2.3.6 Baicalin处理对猪卵母细胞PA后胚胎体外发育能力的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章:Baicalin对猪PA,SCNT,IVF胚胎发育能力的影响 |
| 3.1 试验材料与仪器 |
| 3.1.1 主要试剂 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 培养液配方 |
| 3.1.4 猪卵巢获取 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 猪耳皮成纤维细胞建立 |
| 3.2.2 猪供体细胞的准备 |
| 3.2.3 体细胞核移植 |
| 3.2.4 体外受精 |
| 3.2.5 免疫荧光染色 |
| 3.2.6 RT-PCR |
| 3.2.7 实验设计 |
| 3.2.8 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 不同浓度baicalin处理对猪PA胚胎体外发育能力的影响 |
| 3.3.2 Baicalin处理对猪PA胚胎中ROS产生的影响 |
| 3.3.3 Baicalin处理对猪PA胚胎中凋亡相关基因mRNA表达的影响 |
| 3.3.4 Baicalin处理对猪PA胚胎△Ψm和ATP表达的影响 |
| 3.3.5 Baicalin处理对猪PA胚胎中SHH信号通路相关基因和蛋白表达量的影响 |
| 3.3.6 Cyclopamine对猪PA胚胎体外发育能力的影响 |
| 3.3.7 Baicalin和Cy共同处理对猪PA胚胎中ROS产生的影响 |
| 3.3.8 Baicalin和Cy共同处理对猪PA胚胎△Ψm和ATP表达量的影响 |
| 3.3.9 Baicalin和Cy共同处理对猪PA胚胎体外发育能力的影响 |
| 3.3.10 Baicalin处理对猪IVF和SCNT胚胎体外发育能力的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章:Baicalin保护酒精诱导的成年昆明鼠精子损伤 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 仪器与设备 |
| 4.1.3 昆明鼠获取 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 附睾精子密度检测 |
| 4.2.2 精子尹红染色 |
| 4.2.3 RT-PCR |
| 4.2.4 实验设计 |
| 4.2.5 统计分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 酒精对成年小鼠体重、生存能力、精子密度的影响 |
| 4.3.2 不同浓度baicalin对酒精诱导的成年小鼠体重降低、生存能力下降、精子损伤的保护作用 |
| 4.3.3 不同浓度baicalin处理对酒精诱导的小鼠睾丸组织凋亡、抗凋亡、炎症因子相关基因mRNA表达量的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章:结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表文章 |
| 缩略词表 |
（4）谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞及相关基因表达影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 早期胚胎发育阻滞的影响因素 |
| 1.2 发育阻滞研究进展 |
| 1.3 活性氧参与发育阻滞机制 |
| 1.4 活性氧与胚胎抗氧化体系 |
| 1.5 本试验的研究目的及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 试剂及仪器 |
| 2.3 主要溶液配制 |
| 2.4 试验设计 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.6 数据统计分析 |
| 第三章 结果与分析 |
| 3.1 谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞的检测 |
| 3.2 小鼠MZT时期胚胎内部谷胱甘肽和活性氧含量检测 |
| 3.3 小鼠MZT期胚胎内谷胱甘肽氧化还原系统基因的表达分析 |
| 3.4 小鼠MZT期胚胎内合子基因的表达分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 6 mmol/L谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞的影响 |
| 4.2 谷氨酸对小鼠MZT期胚胎内部活性氧含量的影响 |
| 4.3 谷氨酸对小鼠MZT期胚胎内部谷胱甘肽含量的影响 |
| 4.4 谷氨酸对小鼠MZT期谷胱甘肽氧化还原系统基因表达的影响 |
| 4.5 谷氨酸对小鼠MZT期合子基因表达的影响 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）RepSox和LBH589联合处理对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 胚胎早期发育 |
| 1.1.1 胚胎早期发育的信号通路 |
| 1.1.2 胚胎发育阻滞 |
| 1.1.3 胚胎基因激活 |
| 1.2 胚胎发育的多能性 |
| 1.2.1 多能性转录因子NANOG |
| 1.2.2 多能性转录因子POU5F1 |
| 1.2.3 多能性转录因子SOX2 |
| 1.3 RepSox对多能性的影响 |
| 1.4 表观遗传修饰与重编程 |
| 1.4.1 组蛋白修饰 |
| 1.4.2 组蛋白去乙酰化抑制剂 |
| 1.4.3 DNA甲基化 |
| 1.4.4 DNA甲基化抑制剂 |
| 1.5 体细胞克隆技术现状 |
| 1.5.1 应用 |
| 1.5.2 面临问题 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 试验材料与仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 试验药品配制 |
| 2.2.1 供体细胞培养液 |
| 2.2.2 卵母细胞及胚胎培养液 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 猪卵母细胞体外成熟培养 |
| 2.3.2 猪供核体细胞的准备 |
| 2.3.3 体细胞核移植 |
| 2.3.4 Hoechest33342染色 |
| 2.3.5 免疫荧光染色 |
| 2.3.6 TUNEL染色 |
| 2.3.7 实时定量PCR |
| 2.4 统计分析 |
| 第三章 结果与分析 |
| 3.1 RepSox和不同的HDACi对猪SCNT胚胎体外发育的影响 |
| 3.2 RepSox和LBH589对猪SCNT胚胎多能性的影响 |
| 3.3 RepSox和LBH589对猪SCNT胚胎表观遗传的影响 |
| 3.4 RepSox和LBH589对猪SCNT囊胚凋亡的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
（6）LncRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词(Abbreviation) |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 LncRNA调控早期胚胎发育的研究进展 |
| 1 LncRNA的特性 |
| 1.1 LncRNA的表达特性 |
| 1.2 LncRNA开放阅读框的长度 |
| 1.3 LncRNA的编码潜能 |
| 2 染色质相关lncRNA的作用方式 |
| 2.1 作为引导分子 |
| 2.2 作为支架平台 |
| 2.3 作为变构调节物 |
| 2.4 作为诱导分子 |
| 2.5 结合RNAP Ⅱ |
| 3 LncRNA与早期胚胎发育 |
| 3.1 卵母细胞成熟 |
| 3.2 精子发生 |
| 3.3 胚胎发育 |
| 3.4 胚胎干细胞多能性 |
| 4 展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 哺乳动物合子基因组激活的调控 |
| 1 DNA甲基化 |
| 1.1 DNA甲基化 |
| 1.2 DNA羟甲基化 |
| 1.3 印记基因甲基化 |
| 2 组蛋白甲基化 |
| 2.1 H3K4甲基化 |
| 2.2 H3K9甲基化 |
| 2.3 H3K27甲基化 |
| 3 非编码RNA |
| 3.1 SncRNA |
| 3.2 LncRNA |
| 4 转录因子 |
| 4.1 调控转录必须转录物 |
| 4.2 调节染色质可塑性 |
| 4.3 调控母源物质降解和合子基因转录 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 影响体细胞核移植重编程的因素 |
| 1 供体细胞 |
| 1.1 细胞类型 |
| 1.2 细胞周期 |
| 1.3 细胞分化状态 |
| 2 DNA甲基化 |
| 2.1 DNA甲基化转移酶 |
| 2.2 DNA去甲基化 |
| 3 组蛋白乙酰化 |
| 3.1 TSA |
| 3.2 Scriptaid |
| 3.3 Oxamflatin和SAHA |
| 4 组蛋白甲基化 |
| 4.1 H3K4甲基化 |
| 4.2 H3K9甲基化 |
| 4.3 H3K27甲基化 |
| 4.4 H3K36甲基化 |
| 4.5 H3K79甲基化 |
| 5 非编码RNA |
| 5.1 miRNA |
| 5.2 LncRNA |
| 6 展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第四章 山羊ZGA期差异表达mRNA和lncRNA的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要仪器用品 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 山羊ZGA期的确定 |
| 2.2 山羊ZGA期mRNA的表达特性 |
| 2.3 差异表达mRNA的验证 |
| 2.4 山羊ZGA期lncRNA的表达变化 |
| 2.5 新lncRNA表达水平的验证 |
| 2.6 功能性lncRNA的筛选 |
| 2.7 干扰lnc_137对山羊胚胎体外发育能力的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 山羊ZGA期核移植胚胎差异表达mRNA的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要仪器用品 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 山羊核移植胚胎ZGA的状态 |
| 2.2 组蛋白甲基化相关基因的表达水平 |
| 2.3 山羊核移植胚胎H3K4me3的表达水平 |
| 2.4 Kdm5b蛋白保守性分析 |
| 2.5 Kdm5b对山羊核移植胚胎体外发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 LncRNA调控山羊核移植胚胎重编程的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要仪器用品 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 山羊ZGA期核移植胚胎lncRNA的表达特性 |
| 2.2 功能性lncRNA的筛选 |
| 2.3 功能性lncRNA的验证 |
| 2.4 干扰lnc_3712对核移植胚胎体外发育的影响 |
| 2.5 干扰lnc_3712影响核移植胚胎发育的机制 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 核移植胚胎及克隆山羊Xist启动子甲基化状态的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要仪器用品 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 1.5 试验方法 |
| 1.6 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 山羊Xist启动子序列分析 |
| 2.2 Xist DMR区域的验证 |
| 2.3 核移植胚胎ZGA期Xist甲基化状态 |
| 2.4 克隆山羊耳组织中Xist甲基化状态 |
| 2.5 死亡克隆山羊肺脏中Xist甲基化状态 |
| 2.6 死亡克隆山羊脑组织中Xist甲基化状态 |
| 2.7 Xist及X染色体相关基因表达变化 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的内容 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（7）培养液中添加虾青素对小鼠早期胚胎发育的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 虾青素 |
| 1.1.1 虾青素的概念 |
| 1.1.2 虾青素的理化性质 |
| 1.1.3 虾青素的来源,分布及异同点 |
| 1.2 氧化应激 |
| 1.2.1 氧化应激的概念 |
| 1.2.2 热应激,热应激反应的概念 |
| 1.2.3 自由基,活性氧的概念 |
| 1.2.4 生物体内的自由基种类 |
| 1.2.5 生物体内自由基的生成及机制 |
| 1.2.6 自由基的生物学效应 |
| 1.3 虾青素的生物学效应 |
| 1.3.1 虾青素的抗氧化性和清除自由基的作用 |
| 1.3.2 虾青素的抗氧化机制 |
| 1.3.3 抑制膜质氧化 |
| 1.3.4 增加抗氧化酶表达 |
| 1.4 体外胚胎生产 |
| 1.4.1 体外受精 |
| 1.4.2 精子获能 |
| 1.4.3 体外受精 |
| 1.4.4 影响精子体外受精的因素 |
| 1.5 胚胎体外发育 |
| 1.5.1 早期胚胎发育进程 |
| 1.5.2 早期胚胎发育阻滞 |
| 1.5.3 影响体外发育的因素 |
| 1.6 本文的研究内容、目的及意义 |
| 1.7 本实验的技术路线 |
| 第2章 虾青素对小鼠早期胚胎体外培养的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.1.3 实验动物处理 |
| 2.1.4 体外受精 |
| 2.1.5 早期胚胎体外培养 |
| 2.1.6 观测指标及数据处理 |
| 2.1.7 囊胚细胞计数 |
| 2.1.8 数据分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 添加虾青素对卵裂率和囊胚率的影响 |
| 2.2.2 添加虾青素对体外受精胚胎发育的影响 |
| 2.2.3 虾青素对囊胚细胞数的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 虾青素对卵裂率和囊胚率的影响 |
| 2.3.2 添加虾青素对体外受精胚胎发育的影响 |
| 2.3.3 添加虾青素对囊胚细胞数的影响 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 小鼠早期胚胎发育过程中转化因子TGF-β和凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验动物处理 |
| 3.1.3 小鼠胚胎细胞总RNA的提取、纯化 |
| 3.2 实时荧光定量PCR检测结果 |
| 3.3 TGF-β、Bcl-2 基因在不同浓度的虾青素中的表达量 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 在不同浓度虾青素中囊胚的TGF-β和Bcl-2 基因表达调控 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）ROS诱发P53介导的信号通路对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 哺乳动物早期胚胎体外发育的研究进展 |
| 1.2 P53基因的研究进展 |
| 1.3 本文研究思路及创新 |
| 第二章 过氧化氢诱导的胚胎氧化应激反应 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 主要实验材料与方法 |
| 2.3 主要实验方法 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.5 小结与讨论 |
| 第三章 ROS诱导P53信号通路对胚胎发育的影响 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料方法 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.5 小结与讨论 |
| 第四章 P53在早期胚胎中的氧化还原作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 主要实验材料与方法 |
| 4.3 主要实验方法 |
| 4.4 实验结果与分析 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A (攻读学位期间发表论文) |
（9）TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 一、动物胚胎发育技术的研究 |
| 1.动物胚胎发育和动物胚胎技术的简介 |
| 2.胚胎技术的应用和价值 |
| 2.1 动物胚胎技术在畜牧业中应用的价值 |
| 3.动物胚胎技术的发展和前景 |
| 3.1 PCR法进行胚胎性别鉴定的前景和展望 |
| 3.2 转基因动物进展 |
| 3.3 哺乳动物核移植技术研究进展 |
| 4.动物早期胚胎发育技术存在的问题 |
| 4.1 激素对胚胎发育的影响 |
| 4.1.1 促排卵对胚胎发育的影响 |
| 4.1.2 激素对胚胎发育的影响 |
| 4.2 培养液对胚胎发育的影响 |
| 4.3 胚胎培养系统 |
| 4.3.1 培养方式对胚胎发育的影响 |
| 4.3.2 能量物质对胚胎发育的影响 |
| 4.3.3 物理因素对胚胎发育的影响 |
| 4.4 卵子的数量和质量 |
| 4.5 动物合子原核构型及早期卵裂 |
| 4.6 胚胎碎片 |
| 4.7 动物胚胎致密化基因表达差异 |
| 4.8 细胞因子在胚胎发育过程中的作用 |
| 4.8.1 白血病抑制因子 |
| 4.8.2 干细胞因子 |
| 4.8.3 可溶性人类白细胞抗原G(sHLA.G)分子 |
| 4.8.4 白细胞抗原G(HLA.G)分子 |
| 4.8.5 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF) |
| 4.8.6 各类生长因子 |
| 4.8.7 单胚胎k—Y寡糖 |
| 4.9 其他因素 |
| 二、小鼠早期胚胎体外发育研究进展 |
| 1.小鼠早期胚胎体外发育的意义与研究进展 |
| 2.国内研究进展 |
| 三、曲古抑菌素A(TSA)在胚胎发育中的应用和研究 |
| 1.曲古抑菌素A对动物胚胎应用的概述 |
| 1.1 曲古抑菌素A对羊胚胎的应用 |
| 1.2 曲古抑菌素A对猪胚胎的应用 |
| 第二章 小鼠孤雌胚的建立 |
| 一、小鼠孤雌胚的概述 |
| 二、小鼠孤雌胚的建立 |
| 1.卵母细胞的收集 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2.卵母细胞的孤雌激活 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 数据统计 |
| 2.4 数据的分析和讨论 |
| 第三章 TSA对早期胚胎的体外作用 |
| 1.实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验设计 |
| 2.数据统计和分析 |
| 2.1 数据统计 |
| 2.2 数据分析和讨论 |
| 第四章 结果讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 攻读学位期间发表文章 |
（10）输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育机理的探索（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料及试剂 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 胚胎的收集 |
| 1.2.2 小鼠输卵管上皮细胞系的建立及纯化 |
| 1.2.3 输卵管上皮细胞共培养 |
| 1.2.4 胚胎内部ROS含量检测 |
| 1.2.5 阻滞胚胎分类 |
| 1.2.6 细胞活性检测 |
| 1.2.7 抗氧化基因转录量变化检测 |
| 1.2.8 试验设计 |
| 1.2.9 数据统计 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 输卵管上皮细胞共培养体系的建立 |
| 2.2 共培养对合子发育的作用 |
| 2.3 胚胎内部ROS含量检测 |
| 2.4 共培养对阻滞胚胎类型的影响 |
| 2.5 共培养细胞活性变化 |
| 2.6 共培养细胞内部抗氧化相关基因转录量的变化 |
| 3 讨 论 |
| 4 结 论 |
四、哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的产生与克服（论文参考文献）
- [1]谷氨酸对体外培养小鼠胚胎阻滞阶段的抗氧化水平及后续发育的影响[D]. 蔡光雨. 延边大学, 2020(05)
- [2]KDM4A和GSK126对猪克隆胚胎的体细胞重编程及体外发育潜能影响的研究[D]. 王涛. 华中农业大学, 2020
- [3]黄芩苷对猪卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育能力的影响[D]. 郭庆. 延边大学, 2019(01)
- [4]谷氨酸对小鼠MZT期胚胎发育阻滞及相关基因表达影响的研究[D]. 刘宇. 延边大学, 2019(01)
- [5]RepSox和LBH589联合处理对猪体细胞克隆胚胎体外发育的影响[D]. 罗肇博. 延边大学, 2019(01)
- [6]LncRNA参与调控山羊合子基因组激活期核移植胚胎重编程的研究[D]. 邓明田. 南京农业大学, 2018(07)
- [7]培养液中添加虾青素对小鼠早期胚胎发育的影响[D]. 阿拉法特·阿木拉提. 新疆农业大学, 2017
- [8]ROS诱发P53介导的信号通路对小鼠早期胚胎发育阻滞的影响[D]. 胡德宝. 延边大学, 2016(09)
- [9]TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究[D]. 施超. 上海交通大学, 2016(03)
- [10]输卵管上皮细胞共培养促进小鼠早期胚胎发育机理的探索[J]. 庄利利,胡德宝,蔡丽娟,张也,李钟淑,方南洙. 中国农业大学学报, 2013(04)