一、染料木黄酮对大鼠颅盖骨骨吸收活性的作用（论文文献综述）
顾建忠[1]（2021）在《广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响》文中提出目的:探讨广西壮族自治区中少数民族瑶族绝经后妇女的雌激素受体-α基因分布,了解雌激素受体-α基因多态性与瑶族妇女骨质疏松的关系;确定山茶籽提取物对骨质疏松症的影响。方法1广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性对绝经后骨质疏松症的影响选取广西地区,瑶族妇女,612例,取5ml血液样本,DNA提取试剂盒进行DNA的提取,碱性磷酸酶试剂盒检测血液样本的碱性磷酸酶,超声骨密度仪检测患者跟骨骨密度,用酶联免疫吸附法检测雌激素。方法2山茶籽对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响将5月龄,96只雌性大鼠,分为4组,分别为去卵巢组（OVX）,假手术组（Sham）,山茶籽提取物组（Ts）,苯甲酸雌二醇组（E2）。分别在第4、8、12、16周各取六只,麻醉后,对大鼠股骨取材,进行HE染色,测量骨钙,骨磷,骨密度以及相应的雌激素。结果:（1）与其他四个基因比较,60岁之后P基因组的碱性磷酸酶升高,骨密度降低,黄体生成素和促卵泡激素升高,雌二醇和孕酮降低（P<0.05）;与其他四个基因比较,65岁之后Xx基因组的碱性磷酸酶降低,骨密度提高,黄体生成素和促卵泡激素降低,雌二醇和孕酮升高（P<0.05）。（2）去卵巢组的镜下骨组织疏松,骨钙、骨磷、血清护骨素和骨密度低于其他3组（P<0.05）,山茶籽提取物组的骨钙、骨磷、血清护骨素和骨密度与假手术组和雌二醇组无显着差异（P>0.05）。去卵巢组与其他三组比较,血清黄体生成素和促卵泡激素明显升高,雌二醇和孕酮明显降低（P﹤0.05）。山茶籽提取物组的黄体生成素,促卵泡激素,雌二醇和孕酮与假手术组和雌二醇组无显着差异（P>0.05）。结论:（1）绝经后妇女含P基因易患绝经后骨质疏松症,应提前预防;含Xx基因的妇女骨密度高,不易患绝经后骨质疏松症。（2）山茶籽提取物可以提高骨密度以及雌二醇,山茶籽提取物可以用来治疗骨质疏松症。
赵璐[2]（2016）在《仙茅苷抗骨质疏松作用机制及其在Caco-2小肠模型上的吸收特性研究》文中研究指明骨质疏松是一种常见的以单位体积内骨组织含量减少为特点的慢性代谢性疾病,主要表现为股骨、椎骨的骨量减少和骨微观结构的破坏,进而引起全身各处骨质患骨折风险的升高。骨质疏松发病的原因呈现多因素特征,雌激素缺失一直以来被认为是绝经后骨质疏松（I型骨质疏松）主要的致病因素。同样,对于老年男性出现的骨质疏松,随着年龄的下降,性激素的分泌水平下降也是骨丢失的重要原因。雌激素和雄性激素水平的下降引起了骨组织中抗氧化能力的降低,而老化以及其伴随的活性氧水平的升高在骨质疏松的发生中起着重要的作用。激素在骨质疏松发生中的作用非常复杂,其中抗氧化作用在激素（雌激素或者雄激素）对骨质疏松的骨保护作用越来越引起研究者的重视。临床研究证明,绝经后骨质疏松病人抗氧化酶活力的降低与其股骨颈、腰椎和髋部等关系的骨密度下降有着非常密切的相关性。抗骨质疏松药物主要包括双膦酸盐类、选择性雌激素受体调节剂、降血钙素、甲状旁腺激素、雷奈酸锶（锶离子可抑制骨吸收和促进骨形成）和抑制receptor activator for nuclear factor-κB ligand（RANKL）的单克隆抗体狄诺塞麦等。临床研究证明,这些药物的抗骨质疏松作用各有其不足之处。研究新型治疗骨质疏松药物仍有其必要性。较多的基础和临床研究揭示,具有抗氧化作用的天然化合物表现出了比较好的骨保护作用潜力。中药仙茅是石蒜科植物仙茅的干燥根茎,是传统中医的常用补肾中药。仙茅苷是其主要的活性成分,具有比较广泛的生物学活性,主要包括免疫调节、抗氧化、血管生成、抗骨质疏松以及神经保护作用等。在我们的前期研究中,观察到仙茅苷可通过抗氧化作用促进过氧化氢损伤的成骨细胞氧化应激模型骨形成作用;仙茅酚苷类成分也可以通过抗氧化作用抑制去卵巢大鼠的骨丢失,具有良好的骨保护作用。这些初步的研究提示,仙茅酚苷,特别是仙茅苷可能具有进一步向新药研发的潜力。因此,对其药效学作用的进一步证实、可能的作用机制探索及向新药研发过渡需要的药动学参数的初步了解,构成了我们进行此项课题研究的初衷。除对去卵巢大鼠实验性骨质疏松具有良好的骨保护作用外,在本课题的实验研究中,我们还观察到仙茅苷对铁超载致骨丢失动物模型以及铁超载损伤的成骨细胞具有良好的保护作用。在铁超载成骨细胞模型,仙茅苷既体现出升高骨形成标志物一型胶原、骨钙素以及Runx2的蛋白水平,促进氧化应激状态下成骨细胞骨形成作用,又通过升高抗氧化酶上游调控蛋白FoxO1水平,调控其在细胞核内的分布,提高抗氧化酶活力,抑制氧化应激标志蛋白P66磷酸化,保持机体抗氧化/氧化平衡,以及促进成骨细胞的自噬作用和抑制凋亡作用,起到抗骨质疏松作用。β-淀粉样蛋白沉积引起的氧化应激也是继发性骨质疏松的重要致病因素。阿尔茨海默病和骨质疏松是两种密切相关的退行性疾病,并有着许多共同的致病因素。在这两种疾病的发生中,氧化应激都起着重要的作用。在老年人或者绝经后女性中,Aβ在脑中的沉积会引起记忆的损伤,而在骨中的沉积还会破坏骨平衡。在APP/PS1小鼠模型中,仙茅苷可通过升高脑和股骨中抗氧化酶的活力,提高小鼠的抗氧化能力,改善Aβ沉积引起的记忆损伤和骨丢失;在分子水平,仙茅苷可抑制β-分泌酶的活性,并在APP-HEK293细胞中显着降低Aβ42和Aβ40的水平;在Aβ寡聚体处理的成骨细胞模型中,仙茅苷能够抑制氧化应激,促进成骨细胞的骨形成过程;仙茅苷还可通过抑制Aβ寡聚体的沉积及抑制Aβ寡聚体引起的氧化应激状态,显示出良好的神经保护和抗骨质疏松作用。化合物的吸收特性在药物血药浓度和药效作用中起着重要作用。本实验用Caco-2体外小肠吸收模型检测了仙茅苷吸收特性。应用主要影响药物吸收的转运蛋白抑制剂进行仙茅苷吸收机制研究:浓度为100μM的盐酸维拉帕米抑制Caco-2单层细胞p糖蛋白的外排作用;MK 571,苯溴马隆和吲哚美辛用于抑制Caco-2单层细胞总多耐药蛋白或者亚型多耐药蛋白的外排作用;用芹菜素抑制乳腺癌耐药相关蛋白的外排作用;用钒化钠和西咪替丁分别抑制选择性Na/K-ATPase和有机阴离子转运蛋白对药物的内吞作用。结果显示仙茅苷的吸收主要受外排蛋白P-gp和BCRP外排作用的影响。结论:仙茅苷对去卵巢模型大鼠的原发性骨质疏松以及铁超载或Aβ沉积引起的继发性骨质疏松都具有良好的防治作用,并可有效抑制Aβ沉积引起的小鼠记忆损伤;在细胞水平,仙茅苷可通过抗氧化作用,促进铁超载和/或Aβ寡聚体处理的成骨细胞的骨形成作用;通过Caco-2细胞模型,我们揭示了仙茅苷的肠吸收机制。这些结果提示该化合物在防治骨质疏松及老年痴呆可能伴随的骨丢失中有潜在的应用前景。
薛黎明[3]（2012）在《基于蛋白质组学淫羊藿苷防治骨质疏松作用机理及药对“淫羊藿仙茅”配伍机制研究》文中研究表明淫羊藿仙茅是临床常用的温补肾阳的药对。两药均为我国传统中药，2010版《中华人民共和国药典》中均有收录。淫羊藿和仙茅配伍相须为用，相得益彰。使补肾壮阳，强筋健骨，祛风除湿功力增强。淫羊藿的抗骨质疏松作用已有较多报道，其活性部位淫羊藿总黄酮和活性成分淫羊藿苷能显着促进成骨细胞活性，抑制破骨细胞活性，减少骨质的丢失；能促进下丘脑，海马及骨组织中雌激素受体（ER）表达和增强骨组织护骨素（OPG）表达。仙茅作为补肾壮阳的药物，具有确切的防治骨质疏松作用。仙茅能够抑制骨吸收、降低去卵巢大鼠的骨丢失；仙茅苯甲酸酯类总酚苷能够增加成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶活性；仙茅苷降低破骨细胞的形成分化和抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。仙茅酚苷类成分具有抗氧化、调节免疫和植物雌激素等作用。本实验在明确二仙汤对骨质疏松确切防治作用的基础上，对二仙汤内君药药对淫羊藿仙茅抗骨质疏松的配伍机制进行了研究。主要包括：一、基于蛋白组学研究淫羊藿苷防治骨质疏松作用机理淫羊藿苷对下丘脑-垂体-性腺（甲状腺，肾上腺）轴靶器官（下丘脑，垂体，子宫，骨骼）的蛋白质组学结果显示，差异蛋白功能与细胞凋亡，能量代谢，细胞骨架，蛋白质聚集、折叠，分子伴侣，氧化应激以及MAPK通路等相关。揭示淫羊藿苷多靶点、多途径的作用机制。二、淫羊藿仙茅药对抗骨质疏松活性成分筛选本研究考察了淫羊藿苷、淫羊藿次苷、宝藿苷和朝藿定C、仙茅苷、仙茅素、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷的成骨细胞活性和破骨细胞活性。主要内容为对新生大鼠颅盖骨成骨细胞成骨细胞增殖、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响；对新生大鼠颅盖骨成骨细胞为模型，骨髓单核细胞经1,25-（OH）2-VD3和地塞米松共同诱导而得到的破骨细胞进行TRAP酶活性的影响；并观察了对骨髓单核细胞经细胞因子M-SCF、RANKL诱导的破骨细胞和成骨细胞的细胞线粒体膜电势、细胞内ATP含量及细胞骨架结构的影响，筛选得出仙茅苷和淫羊藿苷的作用明显。三、淫羊藿总黄酮及仙茅苯甲酸酯类总酚苷配伍防治骨质疏松作用研究本研究采用去卵巢骨质疏松大鼠模型（OVX），通过骨密度，骨组织形态计量学，血清、尿液骨相关生化指标（Ca、P、Cr含量，ALP活性，孕激素含量），血清中氧化应激相关酶活性（谷胱甘肽过氧化酶、超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶）及丙二醛的含量)等指标来考察淫羊藿总黄酮、仙茅苯甲酸酯类总酚苷以及配伍前后防治骨质疏松的作用；通过观察靶器官（子宫、阴道、乳腺）切片和考察这些中器官雌激素表达的变化，确定淫羊藿总黄酮和仙茅苯甲酸酯类总酚苷以及配伍后有无显着毒性作用。结果显示，不论是有效性或安全性，配伍后均体现为相加作用。我们还通过代谢组学考察了OVX大鼠和给药大鼠血浆及尿液中代谢产物变化，结果显示，淫羊藿总黄酮组以及配伍组能显着改善OVX导致的尿液和血液的代谢物变化这些显着变化的代谢物仙茅苯甲酸酯类总酚苷主要与能量代谢、氨基酸代谢、氧化应激和脂肪代谢相关。四、淫羊藿苷和仙茅苷防治骨质疏松配伍作用研究根据蛋白组研究结果，骨质疏松参与调控能量代谢、细胞骨架形成。因此，我们观察了淫羊藿苷和仙茅苷以及配伍对成骨细胞和破骨细胞作用线粒体膜电势，ATP含量以及细胞骨架的作用。结果显示，成骨细胞活性包括（增殖、ALP活性，骨结节）体现相加关系，破骨细胞活性（破骨细胞数目，TRAP活性，CK活性）体现显着的协同作用。依据骨质疏松发生的原理，进一步考察了淫羊藿苷和仙茅苷以及配伍对破骨细胞MAPK通路及OPG/RANKL通路的影响。结果显示显着的协同作用。综上所述，骨质疏松与能量代谢、细胞骨架关系密切。淫羊藿总黄酮和仙茅苯甲酸酯类总酚苷配伍，对骨质疏松整体动物有效性和安全性总体呈现相加作用。淫羊藿苷和仙茅苷配伍对成骨细胞活性体现相加作用，破骨细胞活性体现协同作用。本实验为复方二仙汤有效成分间的关联性研究提供方法和思路。
鲍蕾蕾,卞俊,张巧艳,秦路平,袁兵[4]（2010）在《巴戟天2-羟基-3-羟甲基蒽醌对破骨细胞性骨吸收的影响》文中研究说明目的研究2-羟基-3-羟甲基蒽醌对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响,探讨2-羟基-3-羟甲基蒽醌抑制骨吸收的细胞学基础。方法采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-（OH）2VitaminD3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。通过相差显微镜观察细胞形态,抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）染色和骨片上骨吸收陷窝的形成鉴定破骨细胞。磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,计算机图像分析技术测定骨片上破骨细胞性骨吸收陷窝的面积,荧光酶标方法测定组织蛋白酶K的活性。结果 2-羟基-3-羟甲基蒽醌在0.110μmol·L-1范围内,浓度依赖的抑制破骨细胞的TRAP酶活和骨吸收陷窝面积两项指标。在10μmol·L-1浓度下、TRAP活性和破骨细胞性的骨吸收陷窝面积相对于空白对照组的抑制率分别是31.02%和78.71%。同时2-羟基-3-羟甲基蒽醌在1μmol·L-1浓度下对破骨细胞的TRAP阳性细胞数和CK酶活有最强的抑制作用,抑制率为13.68%和22.75%。结论 2-羟基-3-羟甲基蒽醌通过抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能来减少骨质的丢失。
鲍蕾蕾,秦路平,卞俊,焦磊,吴岩斌,韩婷,张巧艳[5]（2009）在《巴戟天甲基异茜草素对破骨细胞性骨吸收的影响》文中研究指明目的研究甲基异茜草素抑制骨吸收的细胞学机制。方法采用原代培养的成骨细胞和骨髓单核细胞联合培养的方法,在1,25-（OH）2VitaminD3和地塞米松作用下,使骨髓单核细胞分化形成破骨细胞。磷酸苯二钠法测定破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP）的活性;计算机图像分析技术测定骨片上破骨细胞性骨吸收陷窝的面积;荧光酶标方法测定组织蛋白酶K的活性。结果甲基异茜草素在0.1～10μmo.lL-1范围内,浓度依赖性地抑制破骨细胞形成、分化、TRAP酶活性和在骨片上形成的吸收陷窝的数目和面积。结论甲基异茜草素通过抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能来减少骨质的丢失。
王建[6]（2009）在《大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究》文中研究说明骨质疏松是一种以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的中老年常见疾病,主要表现为髋部和/或腰椎骨折,女性尤为严重。在西方人群中,髋部骨折的发生率随着年龄增加呈指数增长。50岁以上的骨折病例中女性与男性比例为3:1。世界范围内,随着老年人口比重的增加,骨质疏松性骨折的发生也显着增加。我国作为发展中国家,人口基数大,老龄人群增加速度快,这就决定了骨质疏松症,尤其是绝经后骨质疏松（postmenopausal osteoporosis, PMOP）已成为我国严重的公众健康问题。因此,深入研究PMOP的防治措施,对提高绝经后妇女的健康及生活质量具有重要的现实意义。业已证明,绝经后雌激素减少所导致的骨转换增加是PMOP的主要发病原因。激素替代治疗（hormone replacment therapy, HRT）是国际上广泛开展,用以维持体内雌激素水平、改善更年期症状的治疗方案。大量研究证实HRT能预防绝经后妇女的骨质疏松及相应骨折的发生,然而美国妇女健康倡议（Women’s Health Initiative,WHI）等大型人群研究发现HRT同时能引起治疗人群罹患乳腺癌、心血管疾病的风险显着增加。美国食品药品监督管理局由此建议不能将HRT用以绝经后妇女骨质疏松预防的一线方案,而应当通过膳食、运动等途径来寻找新的防治方法。近年来,植物雌激素、尤其是大豆制品来源的大豆异黄酮（soybean isoflavones, SI）备受研究关注,并被期待是HRT的天然替代物。该类化合物具有弱雌激素样作用,同时作为雌激素受体的选择性调节剂能够对雌激素生物效应发挥相应的拮抗或促进效应,从而没有雌激素的副作用。流行病学研究发现,在摄入豆制品较高的亚洲地区绝经后妇女中,其膳食SI摄入水平与骨密度之间呈显着正相关。然而,随后开展的诸多临床研究在评价膳食大豆制品或SI干预对绝经后妇女骨密度的影响效应时,所得结果却不尽相同。目前认为,以往研究之间观察到的SI干预效应的差异主要与不同研究人群间体内SI的代谢水平不同有关。其中,作为SI的代谢终产物之一,雌马酚（equal, Eq）与其它代谢物如苷元金雀异黄素（genistein, GNT）、黄豆黄素（glycitein, GLY）、双氢大豆黄酮苷元（dihydrodaidzein,DHD）等相比具有更强的雌激素受体结合能力和稳定性,但在人群中仅有30%50%的个体能产生Eq（equol producer, EP+）,且不同人种对Eq的代谢能力也不同。以往评价豆制品或SI摄入对骨质疏松防治效果的研究大都在高加索籍妇女中开展,且未考虑不同Eq代谢表型下豆制品摄入对PMOP影响的差异。因此,探讨PMOP发生的危险因素、膳食结构与SI代谢相关因素,深入观察SI干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应并探讨其相关机制,对于指导女性合理食用大豆及其制品防治PMOP具有重要的现实意义。基于以上分析,本研究围绕不同Eq代谢表型对大豆制品生物学效应的潜在影响,通过病例-对照研究,按统一标准共纳入PMOP新发病例152名,对照者308名,探讨了绝经后妇女骨质疏松症的危险因素,采用半定量食物频数表调查了各研究人群的膳食结构以及豆制品摄入情况,通过高效液相色谱法检测了各人群尿液中异黄酮的代谢水平并分析Eq代谢表型,使用SPSS13.0软件比较不同人群间膳食豆制品摄入及SI代谢产物水平的差异并分析其与PMOP发生风险的相关性。为了进一步分析Eq代谢表型差异性对大豆异黄酮防治PMOP效应的影响,针对PMOP和非PMOP人群的不同Eq代谢表型又分别设置干预组（20g大豆分离蛋白<soy protein isolate, SPI>/d,约含50mgSI）和空白对照组（20g乳清分离蛋白/d,不含SI）,干预6个月。分别在试验0、3、6个月检测各组人群的SI代谢水平、骨密度（Bone mineral density, BMD）以及血脂、性激素水平,深入观察大豆分离蛋白干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应,评价Eq代谢表型差异性对SI防治骨质疏松效应的影响,并就其相关机制进行探讨。此外,体外试验用含20%胎牛血清的α-MEM培养新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞,同时分别给予10-8 mol/L～10-6mol/L的雌马酚和雌二醇（estradiol, E2）以及对应剂量的雌激素受体拮抗剂ICI182780,用Western blot检测细胞蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）的表达,用MTT法检测细胞增殖情况,用对硝基酚磷酸盐法及放免法测定成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatas, ALP）和骨钙素（Boneglaprotein, BGP）的活性,研究雌马酚对体外原代培养成骨细胞增殖和分化作用的影响,旨在从细胞水平探讨雌马酚预防骨质疏松症的作用机制。主要研究结果:一、人群研究1. PMOP常规危险因素调查:髋骨骨折家族史、低身体质量指数和多产次与重庆市绝经后妇女骨质疏松症发生风险呈显着正相关,而经常运动、饮茶以及保持适当的雌激素水平与PMOP发生的风险呈显着负相关。2.膳食豆制品摄入与PMOP发生的相关性:PMOP组膳食大豆蛋白及总大豆制品的摄入量显着低于非PMOP组（P<0.05）,进一步Logistic回归分析发现膳食大豆蛋白及大豆类及其制品的摄入水平与PMOP的发生呈显着的负相关。此外,调查结果还提示膳食中高水平的Ca、Vit A、Vit D以及深色蔬菜、奶类与PMOP的发生呈显着负相关,而动物蛋白、烹饪油摄入量与PMOP的发生呈显着正相关。3. SI代谢水平与PMOP发生的相关性:PMOP组人群的EP+比例为32.2%,显着低于非PMOP人群的40.3% （ P<0.05）。同时,PMOP组人群尿液中Eq、GNT、GLY、DHD水平均显着低于非PMOP组（P<0.05）;进一步Logistic回归分析发现人群尿液中Eq、GNT水平降低与PMOP的发生呈显着的正相关。4. SPI干预对不同Eq代谢表型绝经后妇女SI代谢水平的影响:对于EP+人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显着上升PMOP组和非PMOP组的Eq、GLY及GNT水平（P<0.05）,其中PMOP组的改善效应更显着。对于EP-人群,膳食干预能显着上升PMOP组和非PMOP组的GNT水平（P<0.05）。5. SPI干预对不同Eq代谢表型人群骨密度的影响:对于PMOP人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显着上升EP+、EP-干预组的BMD及T值水平,其中EP+组的改善效应更显着（P<0.01）。对于非PMOP人群,与对照组相比较,膳食干预能显着上升EP+干预组的BMD及T值水平（P<0.05）,而EP-干预组的骨密度值有所上升,但无显着性差异（P>0.05）。6. SPI干预对各组人群血脂及性激素水平的影响:对于PMOP人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显着上升EP+、EP-干预组的E2水平,并显着降低LDL-C以及TC水平（P<0.05）,HDL-C水平略有上升但无显着性意义（P<0.05）,对TG水平无明显改变（P>0.05）,其中EP+组的血脂改善效应更显着（P<0.01）。对于非PMOP人群,与对照组相比较,膳食干预仅能显着改善EP+干预组的TC、LDL-C及E2水平（P<0.05）。二、细胞实验1.雌马酚对OB增殖功能的影响:Eq干预可显着增强OB的MTT吸光度,该效应随干预时间的延长而增加（P<0.05）,而随着浓度的改变无明显的变化（P>0.05）。Eq对OB的MTT吸光度影响弱于E2（P<0.05）。Eq和E2对OB增殖作用均可被ER拮抗剂ICI128780所抑制。2.雌马酚对成骨细胞分化功能的影响:Eq能显着促进成骨细胞的ALP活性和BGP表达,并随浓度升高和时间延长均有上升的趋势。此外,Eq的干预效应明显低于相同干预浓度、相同作用时间的E2（P<0.05）,且二者对OBALP活性和BGP表达的作用均可被ICI128780抑制。3.雌马酚对成骨细胞胶原蛋白含量的影响: Eq能显着提高细胞内羟脯氨酸的含量,并随浓度升高和时间延长均有上升的趋势。Eq对其作用弱于E2,且均可被ICI78280所抑制。4.雌马酚对成骨细胞PKCα表达的影响:Eq干预可明显提高OB的PKCα表达（P<0.05）,并随作用浓度升高而增强的趋势。E2对OB PKCα表达作用明显强于Eq（P<0.05）。各浓度组联合ICI182780作用后,其PKC表达明显受到抑制并具有显着性意义（p<0.05）,但略高于空白对照组。综上所述,本研究从人群病例-对照研究和体外细胞实验两方面,探讨了重庆地区绝经后骨质疏松发病的常规危险因素及其与膳食豆制品摄入、体内SI代谢水平的相关性,并围绕不同Eq代谢表型对大豆制品生物学效应的潜在影响,深入观察大豆分离蛋白干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应,评价Eq代谢表型差异性对SI防治骨质疏松效应的影响,并就其相关机制进行探讨。人群研究发现髋骨骨折家族史、低身体质量指数和多产次是影响重庆市绝经后妇女骨质疏松症发生的重要危险因素,而经常运动、饮茶以及保持适当的雌激素水平则有助于预防PMOP的发生。膳食调查结果发现大豆蛋白、Ca、Vit A、Vit D以及大豆类、深色蔬菜和奶类能有效预防PMOP的发生,而膳食动物蛋白、烹饪油摄入能显着上升PMOP的风险。SI代谢水平分析显示Eq代谢表型分布可能直接影响到人群PMOP的患病,同时尿液中Eq与GNT水平上升能显着降低PMOP的发生风险。大豆分离蛋白干预试验发现,膳食SI干预能显着改善PMOP组的骨密度及血脂、雌激素水平,其中EP+人群的干预效果更为显着;而对于非PMOP人群,研究发现膳食SI干预仅对EP+人群有显着的改善效果。膳食干预对EP-人群也有一定的改善效果,其效应可能主要是通过提高体内GNT水平来发挥。此外,细胞实验发现Eq干预可显着促进成骨细胞的增殖、分化以及骨基质形成,而该效应可不同程度上被ER拮抗剂ICI182780所抑制,推测Eq作为一种天然雌激素,能激活雌激素受体,并通过雌激素受体途径调控细胞的增殖和分化,该调控作用可能与跨膜蛋白PKCα信号转导有关。本研究进一步证实膳食因素对PMOP的发生起着重要作用,并且不同人群中Eq代谢表型的差异性可能是影响大豆异黄酮发挥骨质疏松防治效应的重要因素,其中EP+人群的干预效应更显着。以上结果提示女性应在日常生活中选择合理的生活方式及生育方式,同时积极调整饮食平衡,保证大豆类及其制品、深色蔬菜和奶类的摄入,并适当控制动物性食品和烹饪油的摄入,以从膳食、行为途径上更好地预防PMOP的发生。
朱晓峰[7]（2009）在《淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响》文中指出目的:淫羊藿素为补肾强骨中药淫羊藿的主要成分淫羊藿苷在动物体内代谢后脱去糖基的活性成分,可能是淫羊藿口服吸收后主要发挥药理活性的成分,对其研究更符合淫羊藿临床多口服给药的用药方式。目前其对成骨细胞作用机理的研究尚未见报道。本研究观察淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及观察它对与分化相关的雌激素受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/smads信号通路的影响,明确淫羊藿素作用于成骨细胞而影响骨代谢的具体靶点,对于评价淫羊藿治疗骨质疏松等骨代谢疾病的有效性提供细胞分子学依据。方法:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株的培养及活性观察。2.运用MTT法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14的细胞毒性,确定实验用的药物剂量。3.应用WST-8细胞活力方法、BrdU流式细胞仪方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖的影响。4.应用pNPP方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性的影响,运用双抗夹心ELISA方法检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,运用茜素红染色计数矿化结节的方法评价淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞矿化的影响。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价ER受体信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。6.运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价p38MAPK信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。7.实时荧光PCR检测淫羊藿素对BMP-2、4、7mRNA的表达。运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,检测淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞表达碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素的影响,评价BMPs/Smads信号在淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中的作用。8.Western-blot检测ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,淫羊藿素对p38和Smad1/5/8的蛋白磷酸化情况,评价它们和ER受体信号的关系。结果:1.MC3T3-ElSubclone14前体成骨细胞株,在具有分化条件的培养基中可以向成骨细胞分化。2.淫羊藿素对MC3T3-ElSubclone14细胞毒性的检测发现,IC50浓度为100.154mol/L,10-5.93mol/L浓度以下则对细胞基本上无抑制作用,因此实验药物浓度选择10-8、10-7、10-6mol/L 0.01μM、0.1μM、1μM)为梯度浓度。3.WST-8和BrdU流式细胞仪检测发现,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组的MC3T3-ElSubclone14的细胞活力和细胞增殖指数与对照组比较,在统计学上无显着差异（P＞0.05）。4.在作用48或72小时后,淫羊藿素0.01μM、0.1μM、1μM浓度组MC3T3-ElSubclone14细胞的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原和骨钙素与对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01或0.05）;淫羊藿素作用10天或14天后,各组的矿化结节计数和对照组比较,在统计学上有显着差异（P＜0.01）。5.运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用p38MAPK受体阻断剂SB203580阻断p38MAPK信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）;运用BMPs受体阻断剂Noggin阻断BMPs/Smads信号后,1μM浓度的淫羊藿素促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的特性明显下降,和单纯应用淫羊藿素组在统计学上有显着差异（P＜0.01）。6.淫羊藿素可以提高BMP-2mRNA的表达,并随着浓度的增高而增高,和对照组比较,在统计学上有明显差异（P＜0.01或0.05）,1μM浓度的淫羊藿素可以提高BMP-4mRNA的表达（P＜0.05）,但对BMP-7mRNA无作用（P＞0.01）。7.Western-blot检测发现运用ER受体阻断剂ICI182780阻断ER受体信号后,p38和Smad1/5/8的磷酸化明显减弱。结论:1.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT对MC3T3-ElSubclone14细胞增殖无明显促进作用。2.一定浓度（0.01μM、0.1μM、1μM）的ICT可以促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化,促进其矿化。3.ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化和ER受体信号通路、p38MAPK信号通路、BMPs/Smads信号通路密切相关。4.在ICT促进MC3T3-ElSubclone14细胞分化的过程中,ER受体信号通路在p38MAPK信号通路和BMPs/Smads信号通路的上游。5.实验结果提示ICT在MC3T3-ElSubclone14细胞分化过程中所显示的主要作用可能和它的类雌激素样活性有关。
张军芳[8]（2009）在《异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究》文中研究指明目的:骨质疏松症是一种多病因的增龄性病变,随着老龄化社会的到来越来越受到人们的重视。它的基本病理机制是骨代谢过程中破骨细胞（osteoclast,OC）骨吸收增加与成骨细胞（osteoblast,OB）骨形成减少,导致人体内的钙磷代谢不平衡,骨密度（Bone mineral density,BMD）逐渐减小而引起的。病因主要与年龄、内分泌紊乱、钙吸收不良以及免疫、营养等因素有关。雌激素替代疗法（estrogen replacement therapy,ERT）可以抑制骨质丢失,是目前临床防治绝经后妇女骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）的首选疗法。但长期使用可能增加子宫内膜癌及乳腺癌的发病几率。目前人们将寻找雌激素替代药物的目光放在了植物雌激素上。实验发现用含有一定浓度补骨脂注射液的DMEM培养成骨细胞有显着的促增殖作用,能影响骨的合成代谢,具有防治骨质疏松的作用。异补骨脂素是从补骨脂中提取的香豆素类化合物,属于植物雌激素的一种。本课题组前期研究的结果显示异补骨脂素对于促进大鼠成骨细胞增殖和提高碱性磷酸酶活性有较好的作用。锌,是维持机体正常生理功能和机体内环境正常生化代谢所必需的微量元素,也是骨代谢中的重要微量元素之一,可以有效刺激成骨细胞的骨形成和抑制破骨细胞的骨吸收作用。有研究显示微量元素锌可维持细胞周期的正常进行,促进细胞增殖分化;其对成骨细胞增殖及分化的原理可能是锌通过氨酰基转移核糖核酸合成酶刺激体外成骨细胞的蛋白质合成,从而促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖与分化。大量研究报道某些药物因素和营养因子可以防治骨质流失,目前我们对于有效化合物联合应用的了解还比较少。那么植物雌激素与营养因子结合是否对骨质疏松症有增效或协同作用呢?这在预防增龄性骨质流失可能有重要意义。目前已有研究证实大豆异黄酮加钙对绝经后大鼠的骨流失有预防作用,联合应用金雀异黄素和锌对大鼠股骨组织的骨成分有协同增效作用。异补骨脂素和锌结合对骨代谢有加强和/或协同效应的这种细胞机制尚未见报道,本研究即着眼于测定异补骨脂素与营养因子锌联合应用对成骨细胞的增殖与分化是否有协同增效的作用。实验采用体外培养成骨细胞的方法,观察异补骨脂素和锌对成骨细胞增殖与分化的影响。采用RT-PCR的技术,检测了异补骨脂素和锌对成骨细胞分泌的蛋白COLI mRNA,Smad4 mRNA,Runx2 mRNA,Osterix mRNA表达的影响。从细胞和分子水平来探讨异补骨脂素及其与锌配伍的补肾中药防治骨质疏松的机制,以期为提高骨质疏松症的临床疗效以及抗骨质疏松新药的开发提供实验依据。方法:1采用改良的组织块法分离培养新生（24 h内）SD大鼠颅骨成骨细胞。将不同浓度的异补骨脂素（10-8 mol/L10-9 mol/L）与锌（10-4 mol/L10-5 mol/L）加入到培养成骨细胞的培养基中,用倒置显微镜观察细胞形态和数量的改变。2采用噻唑蓝比色（MTT）法,以雌激素（estrogen, E2）为阳性对照,检测加药后,异补骨脂素和锌及其配伍组24 h,48 h,72 h对大鼠成骨细胞增殖的影响。3采用对硝基苯二钠基质动力学法（pNPP）法,以雌激素为阳性对照,检测了异补骨脂素和锌及其配伍组在24 h,48 h和72 h ,96 h对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响。4采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR,reverse transcriptase PCR）方法,以雌激素为阳性对照,检测含有异补骨脂素和锌培养基的大鼠成骨细胞在48 h时I型胶原（COL I） mRNA,Smad4 mRNA,Osterix mRNA,Runx2/Cbfa1 mRNA的基因表达。结果:1阳性对照雌激素对成骨细胞增殖与分化的影响1.1阳性对照雌激素组细胞形态学观察刚接种的成骨细胞成球形,悬浮于培养液中,逐渐沉降贴壁,24 h细胞贴壁展开。展开细胞形态不规则,呈多角形,培养72 h～96 h,细胞为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊。培养96 h～120 h,细胞呈铺路石状态。如果再继续培养,细胞逐渐聚集形成细胞小结,随后胶原堆积,钙盐沉积,形成不透光的矿化结节。连续培养20代,可见细胞体积增大,胞质稀薄,细胞分裂速度下降等一系列细胞衰老的表现。雌激素组与空白对照组相比,在72 h～96 h时,细胞更加密集,细胞间隙少,形态无明显差异。1.2阳性对照雌激素组对大鼠成骨细胞增殖的影响大鼠成骨细胞在含有不同浓度雌激素培养基中培养24 h,在雌激素浓度为(10-5 mol/L,10-7 mol/L和10-8 mol /L)时有促大鼠成骨细胞增殖作用（P<0.05）;培养48 h,在雌激素浓度为(10-6 mol/L, 10-8 mol/L和10-9) mol/L)有促大鼠成骨细胞增殖作用（P<0.05）;72 h,在雌激素浓度为(10-5 mol/L10-7 mol/L)与空白对照组相比有显着的促进大鼠成骨细胞增殖的作用（P<0.05）。1.3阳性对照雌激素组对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响培养48 h ,与空白对照组比较,雌激素组浓度为(10-5mol/L1×10-6 mol/L)有明显的促进碱性磷酸酶活性的作用（P<0.05）;培养72 h,雌激素浓度为(10-6 mol/L 1×10-9) mol/L)有促进碱性磷酸酶活性的作用（P <0.05）。2异补骨脂素、锌及其配伍组对成骨细胞增殖与分化及分泌的蛋白I型胶原（COL I） mRNA和TGF-β)1细胞信号转导因子Smad4 mRNA,核心结合因子1（Cbfa1） mRNA / Runx2 mRNA以及Osterix mRNA表达的影响。2.1异补骨脂素组、锌组、异补骨脂素加锌配伍组细胞形态学观察与雌激素组类似。2.2异补骨脂素和锌各配伍组对大鼠成骨细胞增殖的影响大鼠成骨细胞分别在含异补骨脂素、硫酸锌以及异补骨脂素加硫酸锌培养基中培养24 h,异补骨脂素(10-8 mol/L～10-9 mol/L)、异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)有促增殖作用;异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)与单纯异补骨脂素组或锌组相比增殖作用明显。培养48 h,异补骨脂素10-8 mol/L、异补骨脂素(10-8 mol/L)加硫酸锌(10-4 mol/L)、异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)与空白组比较有促增殖作用,其中异补骨脂素(10-8 mol/L)、异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5) mol/L)组的增殖作用更为显着。2.3异补骨脂素和锌各配伍组对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响大鼠成骨细胞在含异补骨脂素、硫酸锌以及异补骨脂素加硫酸锌培养基中培养48 h,异补骨脂(10-9 mol/L)、硫酸锌(10-4 mol/L)、异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)与空白组比较提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性,其中异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)的促分化作用更明显。培养72 h异补骨脂素(10-8和10-5 mol/L)、异补骨脂素(10-8 mol/L)加硫酸锌(10-4 mol/L)、异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)组有促进碱性磷酸酶活性的作用,异补骨脂素(10-9 mol/L)加硫酸锌(10-5 mol/L)对碱性磷酸酶活性的影响更加显着。2.4异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞分泌的I型胶原（COL I） mRNA表达的影响与空白对照组相比,能显着促进COL I mRNA的表达（P<0.01）;与雌激素组相比也有统计学意义,能明显提高COL I mRNA的相对表达量（P<0.01）。2.5异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞分泌的Smad4 mRNA表达的影响异补骨脂素、异补骨脂素加锌和空白组相比明显促进转化生长因子的信号转导因子Smad4 mRNA的表达（P<0.01）。2.6异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞分泌的Runx2/Cbfa1 mRNA表达的影响异补骨脂素加锌组能明显促进Runx2/Cbfa1 mRNA的表达（P<0.05）;其表达量高于单纯使用异补骨脂素组。2.7异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞分泌的Osterix mRNA表达的影响异补骨脂素组,异补骨脂素加锌组均能增强Osterix mRNA的表达（分别为P<0.05,P<0.01）,异补骨脂素加锌组表达量高于雌激素组和异补骨脂素组。结论:1一定浓度配伍的异补骨脂素加锌可以促进成骨细胞的增殖与分化。异补骨脂素、及其与锌的配伍组促进成骨细胞分泌蛋白I型胶原（COL I） mRNA的表达,上调Smad4 mRNA的表达,并且能够上调Runx2/Cbfa1mRNA和Osterix mRNA的表达,说明异补骨脂素及其配伍组可能通过促进骨形成途径来防治骨质疏松。2植物雌激素异补骨脂素很可能是补肾中药补骨脂发挥补肾壮骨作用的物质基础之一。3说明异补骨脂素加锌有可能是通过促进细胞分泌I型胶原（COL I）,Smad4,Runx2/Cbfa1和Osterix蛋白来发挥其促进骨形成作用。4研究异补骨脂素和锌配伍对骨质疏松的防治作用为抗骨松的药物开发和临床用药提供了实验依据。
张月红,金宏,许志勤,南文考,王先远,薛长勇,高兰兴[9]（2008）在《染料木黄酮对成骨细胞活性的影响》文中进行了进一步梳理目的研究染料木黄酮对成骨细胞活性的影响,探索预防骨质疏松的机制。方法胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶分步消化法获得乳鼠颅盖骨成骨细胞,二代细胞用于实验。在成骨细胞培养基中加入染料木黄酮（×10-5、×10-6、×10-7mol/L）培养48 h和72 h后,采用MTT和3H-TdR测定成骨细胞增殖,原位杂交方法测定c-fos表达。结果培养48 h后,×10-5、×10-6、×107mol/L染料木黄酮组MTT吸光度值与对照组比较,分别增加了105%、136%、143%;培养72 h后,染料木黄酮3个剂量组与对照组比较,分别增加了93%、113%、146%,差异均有显着性（P<0.05）。同时3H-TdR掺入量均显着增加（P<0.05）,各组c-fos表达差异无显着性。结论染料木黄酮可促进成骨细胞的增殖与分化。
曹大鹏[10]（2008）在《仙茅抗骨质疏松化学成分及品质评价研究》文中指出仙茅是石蒜科植物仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的根茎,为我国传统中药,在近两版《中华人民共和国药典》中均有收录。具有补肾助阳、益精血、强筋骨和行血消肿的作用,主要用于肾阳不足、阳痿遗精、虚痨内伤和筋骨疼痛等病症。仙茅的主要化学成分有环菠萝蜜烷型三萜皂苷、酚及酚苷,木脂素及木脂素苷、黄酮等。药理活性研究显示仙茅属植物具有调节免疫、抗氧化、保肝、保护心血管系统、改善味觉、补肾壮阳及抗骨质疏松等作用。目前临床上很多防治骨质疏松的方剂中都含有仙茅,然而其活性物质基础尚不清楚。本课题在明确仙茅防治骨质疏松作用的基础上,对仙茅的化学成分进行了系统的分离和活性评价,明确了其中抗骨质疏松的物质基础。同时,采用HPLC-UV技术对不同来源的仙茅药材进行了品质评价。以去卵巢骨质疏松大鼠为模型,观察了仙茅乙醇提取物的抗骨质疏松作用,结果表明给服仙茅提取物的去卵巢大鼠的骨损失能够得到明显抑制,而且不会影响体重和子宫的变化。仙茅提取物能够明显地增加去卵巢大鼠的血清P、Ca和OPG水平,抑制血清DPD/Cr、ACTH水平和TRAP活性,但对血清TNF-α、IL-6水平和ALP活性作用不明显。因此,仙茅潜在的抗骨质疏松活性得以确认,主要表现为抑制去卵巢的骨吸收和匀?铮、Ca水平,但对促进骨形成不明显。但是,仙茅抗骨质疏松作用的具体机制和活性化学成分有待进一步的研究。利用常规色谱分离和制备高效液相色谱分离相结合,共从仙茅中分离得到7个单体化合物,应用现代波谱技术(UV,MS,IR,1H-NMR,13C-NMR,2D-NMR等)对其进行了结构鉴定。分离得到1个结构新颖的含氯酚类化合物和6个已知的化合物,它们分别为2,6-二甲氧基苯甲酸（1）、仙茅苷（2）、仙茅苷乙（3）、仙茅素A（4）、2,4-二氯-5-羟基-3-甲基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖-（1→6）-β-D-W-吡喃葡萄糖苷,命名为仙茅素D（5）、3,3′,5,5′-四甲氧基-7,9′:7′,9-二环氧木脂素-4,4′-二-O-β-D-葡萄糖苷（6）、β-谷甾醇（7）,其中仙茅素D为一含氯酚类新化合物。通过原代成骨细胞和诱导破骨细胞培养,对分离得到的酚及酚苷类化合物进行活性筛选,结果发现酚苷类化合物能够明显地促进成骨细胞增殖和抑制破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性,具有潜在的抗骨质疏松活性。采用HPLC-UV的方法对12个不同产地的仙茅样品进行指纹图谱研究,并对其仙茅苷和仙茅苷乙的含量进行测定,建立仙茅药材的质量评价方法。结果发现,不同产地的仙茅样品化学成分差异较大,而且仙茅苷和仙茅苷乙的含量也有很大差异。结果发现以云南峨山（CO-ES）样品的仙茅苷含量最高,为0.538%,文山（CO-WS）样品仙茅苷含量最低,为0.028%;云南宜良（CO-YL）样品仙茅苷乙含量最高,为0.330%,重庆巴南（CO-BN）样品仙茅苷乙含量含量最低,为0.103%。所分析样品的采集于范围在东经102.06～106.87、北纬23.15～30.11、海拔315～1850m的生境中,不同产地的仙茅样品化学成分差异较大可能与地理、气候,采集数量、时间,植物的生长年限等因素有关。对仙茅采集样品和商品药材的化学成分对比发现,采集样品和商品药材化学成分也有一定差异,说明药材加工贮存可能也会影响化学成分。研究发现仙茅苷和仙茅苷乙在采集样品中均为主要特征成分,仙茅苷和仙茅苷乙的同时测定更有利于仙茅质量的控制。建立多化学成分的质量控制指标对于衡量药材的品质至关重要,仙茅药材的道地性和加工方法等还许进一步的研究和开发。
二、染料木黄酮对大鼠颅盖骨骨吸收活性的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、染料木黄酮对大鼠颅盖骨骨吸收活性的作用（论文提纲范文）
（1）广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性对绝经后骨质疏松症的影响 |
| 1 内容和方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 雌激素受体-α基因多态性分析 |
| 2.2 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与碱性磷酸酶的结果 |
| 2.3 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与骨密度的结果 |
| 2.4 雌激素受体-αPvuⅡ基因多态性与雌激素水平的结果 |
| 2.5 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与碱性磷酸酶的结果 |
| 2.6 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与超声骨密度的结果 |
| 2.7 雌激素受体-αXbaⅠ基因多态性与雌激素水平的结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 骨质疏松症模型 |
| 3.2 骨质疏松症与雄激素的关系 |
| 3.3 骨质疏松症与雌激素的关系 |
| 3.4 骨质疏松症与雌激素受体-α的关系 |
| 4 小结 |
| 第二部分 山茶籽对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及主要试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠骨组织形态结构 |
| 2.2 大鼠骨钙、骨磷检测结果 |
| 2.3 大鼠骨密度检测结果 |
| 2.4 大鼠血清护骨素检测结果 |
| 2.5 大鼠血清雌激素检测结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 植物性雌激素与破骨细胞的关系 |
| 3.2 植物性雌激素与成骨细胞的关系 |
| 3.3 骨质疏松症的判定 |
| 4 小结 |
| 研究不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 植物性雌激素防治绝经后妇女骨质疏松症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（2）仙茅苷抗骨质疏松作用机制及其在Caco-2小肠模型上的吸收特性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表(Abbreviation) |
| 前言 |
| 第一章 仙茅苷对铁超载引起的骨质疏松的保护作用 |
| 第一节 仙茅酚苷类成分对去卵巢和铁超载致骨质疏松大鼠的骨保护作用 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.3 数据分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.5 小结 |
| 第二节 仙茅苷对铁超载骨质疏松小鼠的骨保护作用 |
| 2.1 实验试剂和主要仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.3 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 小结 |
| 第二章 仙茅苷对Aβ沉积引起的骨质疏松的保护作用 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.3 数据分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第三章 仙茅苷在Caco-2 细胞模型吸收机制研究 |
| 引言 |
| 4.1 实验材料和仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 小结 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的文章或待发表文章 |
（3）基于蛋白质组学淫羊藿苷防治骨质疏松作用机理及药对“淫羊藿仙茅”配伍机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 基于蛋白质组学淫羊藿苷防治骨质疏松作用机制研究 |
| 第一节 淫羊藿苷对下丘脑-垂体-子宫-骨骼轴蛋白组学的影响 |
| 第二节 淫羊藿苷对成骨细胞骨形成作用机制研究 |
| 第三节 淫羊藿苷对破骨细胞骨吸收作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 第二章 药对“淫羊藿仙茅”活性成分筛选 |
| 第一节 药对活性成分对成骨细胞的作用 |
| 第二节 药对活性成分对破骨细胞的作用 |
| 第三章 药对“淫羊藿仙茅”有效部位配伍防治骨质疏松作用研究 |
| 第一节 药对有效部位及其配伍对去卵巢大鼠骨质疏松作用 |
| 第二节 药对有效部位及其配伍防治骨质疏松代谢组学的研究 |
| 参考文献 |
| 第四章 淫羊藿苷和仙茅苷配伍调节骨代谢细胞分子机制研究 |
| 第一节 淫羊藿苷和仙茅苷配伍对成骨细胞的作用 |
| 第二节 淫羊藿苷和仙茅苷配伍对破骨细胞的作用 |
| 第五章 研究总结与讨论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和科研情况 |
| 致谢 |
（6）大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩写览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 大豆异黄酮代谢表型差异与绝经后妇女骨质疏松症发生相关性研究 |
| 第一分题 重庆市绝经后妇女骨质疏松症发生常规危险因素研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二分题 豆制品摄入及体内大豆异黄酮代谢水平与 绝经后骨质疏松症相关性研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三分题 大豆异黄酮干预对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女 骨质疏松症影响及机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 雌马酚对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响及其机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 骨质疏松的危险因素研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的相关论文 |
| 英文论着 |
（7）淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 前言 |
| 1.1 淫羊藿概述 |
| 1.2 淫羊藿苷作用机理研究进展 |
| 1.3 淫羊藿素的来源与活性 |
| 1.4 问题分析和研究思路 |
| 2 实验1 淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞增殖、分化的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 实验2 淫羊藿素通过ER受体和p38MAPK通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 实验3 淫羊藿素通过BMPs/Smads通路影响MC3T3-E1Subclone14细胞的分化活性 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（8）异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写 |
| 异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究 |
| 引言 |
| 第一部分 异补骨脂素加锌对成骨细胞增殖与分化的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞分泌蛋白Ⅰ型胶原表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞 TGF-β信号转导蛋白Smad4 表达的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞 Runx2/Cbfa1, Osterix 表达的影响及其相互联系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述一 成骨细胞相关转录因子的研究进展 |
| 综述二 植物雌激素及其对骨质疏松症的研究概况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）染料木黄酮对成骨细胞活性的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验分组 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 细胞培养 |
| 1.3.2 细胞增殖的测定 |
| 1.3.3 3H-TdR 掺入实验 |
| 1.3.4 c-fos测定方法 |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 成骨细胞生长状态 |
| 2.2 染料木黄酮对成骨细胞增殖的影响 |
| 2.3 成骨细胞c-fos表达 |
| 3 讨论 |
（10）仙茅抗骨质疏松化学成分及品质评价研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 缩写词说明 |
| 前言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 仙茅的化学成分研究进展 |
| 1.2 仙茅的药理活性研究进展 |
| 1.3 骨质疏松症研究现状和进展 |
| 第二章 仙茅对去卵巢大鼠骨质疏松的作用 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 小结和讨论 |
| 第三章 仙茅化学成分的分离鉴定和抗骨质疏松活性物质的筛选 |
| 3.1 仙茅化学成分的提取分离和结构鉴定 |
| 3.2 仙茅石油醚萃取物GC/MS分析 |
| 3.3 仙茅单体化合物对新生大鼠颅盖骨成骨细胞的作用 |
| 3.4 仙茅单体化合物对原代培养的破骨细胞的作用 |
| 3.5 小结和讨论 |
| 第四章 仙茅药材品质评价的研究 |
| 4.1 不同地区产仙茅HPLC化学指纹图谱的研究 |
| 4.2 不同产地产仙茅药材中仙茅苷和仙茅苷乙含量测定 |
| 4.3 小结与讨论 |
| 第五章 研究总结 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 讨论 |
| 5.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、染料木黄酮对大鼠颅盖骨骨吸收活性的作用（论文参考文献）
- [1]广西瑶族妇女雌激素受体-α基因多态性及山茶籽对绝经后骨质疏松症的影响[D]. 顾建忠. 右江民族医学院, 2021(01)
- [2]仙茅苷抗骨质疏松作用机制及其在Caco-2小肠模型上的吸收特性研究[D]. 赵璐. 上海交通大学, 2016
- [3]基于蛋白质组学淫羊藿苷防治骨质疏松作用机理及药对“淫羊藿仙茅”配伍机制研究[D]. 薛黎明. 第二军医大学, 2012(09)
- [4]巴戟天2-羟基-3-羟甲基蒽醌对破骨细胞性骨吸收的影响[A]. 鲍蕾蕾,卞俊,张巧艳,秦路平,袁兵. 2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集, 2010
- [5]巴戟天甲基异茜草素对破骨细胞性骨吸收的影响[J]. 鲍蕾蕾,秦路平,卞俊,焦磊,吴岩斌,韩婷,张巧艳. 解放军药学学报, 2009(06)
- [6]大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究[D]. 王建. 第三军医大学, 2009(05)
- [7]淫羊藿素对MC3T3-E1Subclone14细胞分化及相关信号通路的影响[D]. 朱晓峰. 暨南大学, 2009(09)
- [8]异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究[D]. 张军芳. 河北医科大学, 2009(10)
- [9]染料木黄酮对成骨细胞活性的影响[J]. 张月红,金宏,许志勤,南文考,王先远,薛长勇,高兰兴. 解放军预防医学杂志, 2008(06)
- [10]仙茅抗骨质疏松化学成分及品质评价研究[D]. 曹大鹏. 吉林农业大学, 2008(11)