一、华牧安全健康蛋课题通过鉴定（论文文献综述）
熊枫[1]（2021）在《小型猪四肢荧光素钠循经迁移及运动对迁移影响的观察》文中认为研究背景经络学说千百年来一直指导着中医学的临床实践,经络的客观存在与生物学内涵的研究是中医科研需解决的重要问题。上世纪中叶以来,国内外学者运用现代科学技术观察到了经络的一系列生物物理特性,为经络的客观存在提供了证据。经络是难以用肉眼直接观察到的,因此经络的可视化研究是现代经络科学研究的重要内容之一。但是目前缺乏安全便捷可从体表直接观察的可视化技术,寻找新的可视化技术是亟需解决的问题。只有真真正正的看到经络在哪里,才能更好地对经络的物质基础与效应机制开展研究。张维波教授的“经络间质通道”学说提示,经络是存在于间质中的组织液通道,且该通道具有低流阻的性质,并进行了一系列研究验证了该学说。张教授运用了经络运行组织液这一特性,通过注射与水亲和的荧光示踪剂在大鼠任脉组织液通道上,经过剥离皮肤后可以观察到循经迁移轨迹。但是由于大鼠四肢较小,难以观察四肢部的循经组织液通道分布,且还需剥离皮肤观察,不够方便简捷,还需要寻找合适的动物模型以及摸索更为简捷的实验技术条件来对循经组织液通道进行可视化。因此,本实验使用小型猪作为实验动物,通过向四肢部注射荧光素钠溶液,从体表直接观察荧光循经迁移轨迹,创建一种新的循经组织液通道可视化技术,对循经组织液通道的横切面特征进行深入研究,探寻运动对迁移轨迹的影响,来推动经络生物学内涵的研究。目的和意义本研究在“经络间质通道”学说研究的基础上,探索用荧光照相法进行小型猪四肢循经组织液通道的可视化显示,建立新的从体表可视化观察的技术,观察体表荧光轨迹的迁移特征及其与古典经脉循行路线的吻合度,为“经络间质通道”的研究提供新的影像学实验证据;分析荧光迁移轨迹与浅表静脉的相关性,探讨循经组织液通道的物质基础;观察荧光迁移轨迹横切面的分布特征,分析循经组织液通道的三维特征与空间结构,全方位立体了解循经组织液通道的分布;从间质通道角度探讨清醒和运动对组织液流动的影响,探讨组织液运行动力学的可能机制。研究方法实验一:小型猪循经低电阻线测定及荧光素钠注射参数的筛选用WQ6F30经络定位仪测量小型猪四肢部低电阻点（low impedance point,LIP）及其构成的十二条循经低电阻线（Low impedance line along meridian,LILM）,在LILM于腕踝部的LIP注射荧光素钠（Sodium Fluorescein,SF）溶液,比较不同注射剂量、试剂浓度、注射深度下的SF迁移特征,筛选SF溶液的注射参数。实验二:小型猪四肢荧光素钠循经迁移特征的观察在5只小型猪四肢腕踝部LIP或旁开高电阻点（High impedance point,HIP）注射SF溶液,用荧光照相法采集注射不同时间段SF迁移的图像,分析SF的分布特征,比较SF迁移轨迹与古典经脉循行线的吻合度;用投影式血管成像仪V800P体表投影浅表静脉,比较SF迁移轨迹与浅表静脉的位置关系;测量统计SF迁移轨迹的长度、宽度和长宽比,总结归纳SF循经迁移的规律。3只小型猪注射SF溶液后,运用干冰冷冻小型猪四肢,对SF迁移轨迹循行区域进行横向切片,用荧光照相法采集横切片的图像,观察SF迁移轨迹在横切面的分布特征,分析SF迁移轨迹的三维特征与空间结构。实验三:运动对小型猪四肢荧光素钠迁移的影响4只小型猪分别在清醒不运动（清醒组）、清醒运动（运动组）和麻醉（麻醉组）三种状态下注射SF溶液,清醒组注射后将小型猪放置于特制的猪笼中,运动组注射后将小型猪放置于动物跑步机中运动,麻醉组注射后将小型猪放置于试验台,用荧光照相法采集注射后60min时体表SF迁移轨迹图像,对三者的荧光照片以及心率进行比较,分析清醒不运动和清醒运动对组织液流动的影响。研究结果实验一:小型猪四肢部测得12条LILM,位置与人体十二经脉位置相似;以注射剂量0.4ml、SF浓度5%、注射深度3～4mm作为四肢部LIP注射SF溶液的参数时,体表迁移轨迹荧光强度最强,迁移长度更长,适宜观察。实验二:在小型猪四肢12条LILM注射SF溶液后,沿四肢LILM共出现可重复的7条体表循经迁移轨迹,其中前肢外侧3条,前肢内侧3条,后肢内侧1条。7条（共46例）SF迁移轨迹总平均迁移长度为5.13±2.12cm,平均宽度为0.99±0.5cm,平均长宽比为7.39±6.78;HIP组（11例）注射后进出现接近圆形的局部扩散,平均长度为2.5±0.62cm,平均宽度为2.08±0.43cm,平均长宽比为1.21±0.21。与HIP组比较,四肢LIP组总体SF体表迁移长度极显着延长（P<0.001）;四肢LIP组总体SF体表迁移宽度极显着小于HIP组（P<0.001）;四肢LIP组总体SF体表迁移的长宽比均极显着大于HIP组（P<0.001）;7条SF体表迁移轨迹与LILM的总吻合度为81.4%,迁移轨迹规律与古典经脉循行线基本吻合;体表SF迁移轨迹均与浅表静脉体表投影位置交叉而不重合。SF迁移轨迹是以倒三角形状呈现在横切面上,荧光轨迹在体表处较宽,往深部而渐渐变窄,上可达皮肤表面,下可至骨面,荧光轨迹在深层迁移近似长条形,荧光轨迹中可以看见明显的肌肉边界,荧光染料的范围在两个肌肉边界之间,并且荧光轨迹可向肌肉内扩散一定距离。深层的SF迁移轨迹远比体表处所能观察到的要长,宽度也比体表轨迹更宽一些。实验三:清醒组SF迁移轨迹的平均长度为5.38±0.平均长度为2.99±0.61cm,迹的平均长度为5.58±0.94cm,麻醉组SF迁移轨迹的66cm,运动组SF迁移轨与麻醉组比较,清醒组与运动组SF迁移的轨迹长度均极显着延长（P<0.001）。清醒组与运动组SF迁移轨迹的长度无显着性差异。清醒组平均心率为84 ±12.28bpm,运动组心率为118.5±9.3bpm,麻醉组平均心率71±7.33bpm。清醒组与麻醉组心率均极显着慢于运动组（P<0.001）,麻醉组心率显着慢于清醒组（P<0.05）。结论1.本研究成功建立了小型猪四肢低电阻点注射SF溶液可视化在体显示循经组织液通道的方法。2.可从体表观察到与循经低电阻线基本吻合的SF迁移轨迹,其在肢体深部的迁移长度要大于在体表所观察到的长度。组织液在间质通道中存在定向流动而非依浓度梯度的局部扩散。间质通道通常位于肌肉间隙之中,与浅表静脉交叉而不重合,不属于血管外周隙通道。以上观察提示荧光素钠迁移轨迹存在的通道可能是一种未知的间质通道,其可能与经络有关。3.清醒不运动和清醒运动运动均可以促进组织液的流动,但运动对流动的加强作用不明显。
刘国强[2]（2021）在《基于红外图像奶牛发情信息监测装置的研究》文中研究指明随着科学技术的高速发展,我国的奶牛养殖方式正朝着规模化、智能化方向转变。奶牛养殖中,发情鉴定占据了重要的环节。传统的发情检测需依靠人工来进行判断,人工劳动成本高,且鉴定奶牛是否发情的准确率也有待提高。体温是判断奶牛生理状态的一项重要指数,在奶牛发情期间,体温会出现一定程度的升高或降低,对奶牛的直肠温度进行测量是传统的测温手段,该方法需要将温度计插入奶牛体内测温,这种传统奶牛体温检测方法不便于对奶牛进行发情判断且测温方式效率较低,而且会对奶牛产生一定的应激反应。本文设计了一种对奶牛进行无接触式体温信息采集,同时实现重量信息采集的奶牛发情信息监测装置。主要对以下部分进行了研究:（1）采用Solidworks三维建模软件对奶牛保定装置进行三维建模,主要包括称重地磅、红外测温仪、RFID耳标识别器、进口门、出口门、光电开关等。（2）将整个系统的硬件部分进行了集成,同时设计了PLC程序,可以实现对奶牛的耳标、体重、体温信息的采集、传输和接收。（3）对整个装置进行测试调试,检查各个传感器的工作状态,测试奶牛发情信息监测装置能否满足所想要达到的要求,并将测量的误差控制在合理范围内。
陈佳欢[3]（2021）在《Lp-PLA2敲除兔模型的构建及其对动脉粥样硬化影响的研究》文中认为动脉粥样硬化是心血管疾病（如心肌梗死、中风）的主要原因。由于其广泛的流行性和高死亡率,已成为全球最主要的公共卫生问题。脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）曾广泛被认为可作为心血管疾病风险的生物标志物和极具潜力的治疗靶点。一种口服的、选择性的Lp-PLA2抑制剂（Darapladib）被广泛应用于多项动物实验及临床试验中,以评估是否具有抵抗动脉粥样硬化的作用。临床前实验及二期临床试验结果表明,Darapladib可有效抵抗动脉粥样硬化的发展,阻止晚期坏死核心的扩张。然而两个大规模的三期临床试验结果表明,Darapladib并不能显着降低未来心血管事件的发生风险。因此,明确Lp-PLA2在生理及病理状态下具体的生物学功能及作用机制十分重要。首先,我们通过高胆固醇饮食诱导兔动脉粥样硬化的发生。生理指标监测结果显示,随着动脉粥样硬化的发展,兔血浆Lp-PLA2活性显着升高。通过对诱导终点动脉组织Lp-PLA2 m RNA表达情况的检测,我们发现与对照组（基础饮食）相比,发生动脉粥样硬化个体（高胆固醇饮食）主动脉组织中Lp-PLA2 m RNA表达显着增加;且在发生动脉粥样硬化的个体中,斑块处Lp-PLA2 m RNA的表达明显高于无斑块处动脉组织。此外,我们利用快速蛋白液相色谱技术（FPLC）分离了诱导不同阶段的血浆脂蛋白,并对胆固醇及Lp-PLA2在各种脂蛋白组分中的分布情况进行了检测。结果显示,随着兔动脉粥样硬化的发展,极低密度脂蛋白（VLDL）及中间密度脂蛋白/低密度脂蛋白（IDL/LDL）中的胆固醇含量急剧增加,且Lp-PLA2与VLDL及IDL/LDL的结合比例也明显上升。为了明确Lp-PLA2在动脉粥样硬化过程中的作用及作用机制,我们利用CRISPR/Cas9技术制备出Lp-PLA2基因敲除兔。血浆Lp-PLA2活性检测结果显示,杂合敲除导致Lp-PLA2活性减半,纯合敲除导致Lp-PLA2活性完全缺失。Lp-PLA2基因敲除兔（包括杂合敲除和纯合敲除）表现出明显的低血脂表型,即总胆固醇（TC）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）,甘油三酯（TG）及游离脂肪酸（NEFA）的水平都显着下降。FPLC的结果进一步证明了Lp-PLA2缺失使血浆IDL/LDL组分中的胆固醇被降到较低的水平。对Lp-PLA2调节血脂代谢机制的初步研究结果显示,Lp-PLA2缺失并不会影响肝脏对LDL的清除,但在纯合敲除兔中会通过降低VLDL的初始量来影响LDL的产出。此外,Lp-PLA2缺失会加速甘油三酯的分解代谢。接下来,我们利用高胆固醇饮食同时诱导雄性野生型兔(Lp-PLA2+/+)、Lp-PLA2杂合敲除兔(Lp-PLA2+/-)和Lp-PLA2纯合敲除兔(Lp-PLA2-/-)发生动脉粥样硬化。结果显示,随着诱导时间延长,Lp-PLA2+/-兔血浆中的Lp-PLA2活性以较低水平持续增长,并逐渐丧失其降低TC及LDL-C的功能;而Lp-PLA2-/-兔血浆中始终无Lp-PLA2活性存在,并一直保持着低TC、低LDL-C的状态。诱导终点病变情况的检测结果显示,Lp-PLA2-/-兔主动脉粥样硬化面积明显减小,且未发现晚期病变的发生,如钙化,坏死核心形成。而Lp-PLA2+/-兔的动脉粥样硬化病变情况表现出较大个体差异,不具有明显抵抗动脉粥样硬化的作用。通过对动脉斑块处炎症基因表达的检测分析,我们发现Lp-PLA2完全缺失具有明显的抗炎作用。且体外细胞实验证实,Lp-PLA2杂合或完全缺失会影响参与动脉粥样硬化的关键细胞行为,如单核细胞与内皮细胞间的黏附作用,巨噬细胞或内皮细胞对低密度脂蛋白（LDL）及氧化型低密度脂蛋白（ox LDL）的摄取。综上所述,本研究以Lp-PLA2基因敲除兔为载体,确定了在基础饮食状态下,Lp-PLA2杂合或完全缺失会显着降低血浆脂质水平。且Lp-PLA2完全缺失后,肝脏对LDL的清除能力不受影响,而LDL的产出量显着降低。此外,Lp-PLA2缺失会加速甘油三酯分解代谢。在高胆固醇饮食状态下,Lp-PLA2完全缺失可起到抵抗动脉粥样硬化的作用,且明显抑制斑块内炎症基因的表达;而Lp-PLA2杂合缺失并不能有效抑制动脉粥样硬化发展。本研究为Lp-PLA2是否能作为心血管疾病的治疗靶标提供了新的见解。
侯郑军[4]（2020）在《PLLA血管内支架降解产物乳酸调控再狭窄的生物学机制研究》文中研究指明心血管疾病（cardiovascular disease,CVD）已成为威胁生命健康的首要关键因素。药物洗脱支架（drug eluting stent,DES）是目前临床上治疗狭窄类CVD最有效的手段。然而DES作为永久异物会增加支架内血栓发生的风险。鉴于此,基于可降解材料的生物可吸收支架（bioresorbable stent,BRS）应运而生。其中PLLA（poly-L-lactic acid）支架由于其良好的组织相容性和生物可降解性是第一个进入临床应用的BRS。但临床研究表明PLLA支架植入后晚期呈现严重并发症。因此,探究伴随PLLA支架降解过程血管狭窄发生的诱因将是未来优化聚乳酸类支架设计的关键。乳酸（lactic acid,LA）是PLLA主要降解产物。同时LA也是细胞功能调节器,对于不同的细胞和组织能产生不同的生理或病理效应。PLLA降解过程中LA局部累积会刺激血管引起病理反应,暗示LA可能参与了导致PLLA支架内血管狭窄。由此,本文提出科学假设:“PLLA降解产生的LA可能是导致PLLA支架内血管狭窄的重要致病因素”。围绕此科学假设,本文研究主要得出以下五个结论:1.PLLA支架引发较严重的血管再狭窄在PLLA和316L不锈钢支架（bare metal stent,BMS）植入大白兔颈动脉的第3、6个月时,取支架段血管进行组织形态学分析。H&E（hematoxylin and eosin）染色显示PLLA支架组血管狭窄率远高于BMS组。Masson染色显示PLLA支架段血管纤维化程度明显加重。平滑肌细胞相关基因SM22α免疫组化染色显示其在PLLA支架段血管大量表达,尤其PLLA降解产物聚集的支架丝周围大量聚集表达SM22α,这可能暗示了PLLA降解产物在支架内血管狭窄发生中的作用。2.PLLA降解产物LA刺激引发血管纤维化将LA局部刺激大鼠腹主动脉血管进行实验。Masson染色显示LA刺激血管段纤维化明显加重;免疫组化染色显示纤维相关基因OPN的表达在LA处理组也明显更高;q PCR结果同样显示促纤维基因Collagen-1、Collagen-3、MMP2和MMP9的表达在LA处理组显着上调。这表明LA能诱导血管纤维化,这可能是PLLA支架内血管狭窄发生的原因。3.LA诱导内皮间充质转化（endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT）可能是血管纤维化发生的原因多数证据表明EndMT是诱导血管纤维化的关键原因之一。LA刺激血管段表面染色（enface staining）显示血管内皮层内皮标记物v WF表达随时间逐渐降低,而间充质标记物SM22α则在内皮层与v WF共表达且随时间延长表达逐渐升高;切片染色显示内皮层大量表达SM22α,与v WF共表达的SM22α阳性细胞比例高达70%;免疫组化染色呈现了同样的趋势。这表明LA能在体内诱导EndMT。选用人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）来验证LA是否能在体外诱导EndMT。结果显示LA能够刺激HUVECs细胞形态变为长条状、下调内皮标记物和上调间充质标记物表达,刺激后的HUVECs基因表达谱趋向于TGF-β1处理组。同时也排除了LA导致p H降低对EndMT的影响。这表明在体外,LA也能诱导EndMT。4.LA可能通过GPR81刺激TGF-β1信号介导EndMTLA受体GPR81（G-protein-coupled receptor 81）和TGF-β1信号相关蛋白在LA刺激下表达显着上调。抑制GPR81或TGF-β1表达联合LA刺激后显示内皮标记物和间充质标记物的表达无变化。这表明GPR81和TGF-β1信号参与介导了LA诱导EndMT。TGF-β1和其转录因子Sp-1（specific protein-1）在LA刺激下被激活,而在敲低GPR81后表达却无变化。抑制Sp-1表达联合LA刺激后显示内皮标记物和间充质标记物的表达无变化。这表明Sp-1参与了调节LA激活TGF-β1,LA诱导EndMT的可能机制为LA刺激内皮细胞后GPR81首先被激活进而激活Sp-1,而Sp-1调节TGF-β1信号触发EndMT。5.细胞力学变化可能是LA诱导EndMT的机制之一LA能显着增强HUVECs的迁移能力和收缩能力,同时也能促进HUVECs骨架重排。而抑制骨架变化则能阻滞LA诱导EndMT。这表明细胞力学变化可能也参与了介导LA诱导EndMT。综上,本文证实了LA在PLLA支架内血管狭窄发生中的作用,其机理可能是LA诱导EndMT导致血管纤维化。LA诱导EndMT的可能机制是LA通过GPR81刺激TGF-β1信号介导EndMT。本课题从PLLA降解产物LA累积角度探究了PLLA支架内血管狭窄发生的原因,为研究BRS植入后晚期呈现严重并发症的原因提供了一个新的角度,同时也为未来基于聚乳酸的BRS的优化设计与应用提供了新的理论依据。
焦智慧[5]（2020）在《ADSC-CM对小型猪腹腔镜肝IRI合并部分肝切除保护作用的研究》文中研究说明肝脏是哺乳动物最大的实质器官,具有加工储存营养物质、代谢药物毒物、分泌胆汁、合成蛋白质等重要功能。肝脏缺血再灌注损伤是外科手术中常见的一种临床综合征,20世纪90年代出现了腹腔镜的肝切除术,腹腔镜手术可以最大程度的减少腹壁神经和肌肉的损伤,减少出血、术后疼痛和粘连,加快手术恢复。尽管采用微创外科手术,在肝切除、肝移植、出血性休克等临床手术中仍不可避免的出现肝脏缺血再灌注损伤,严重会导致肝炎以及术后肝功能的衰竭。对于晚期肝功能不全的有效治疗办法是原位肝移植,但也面临着器官短缺,费用昂贵、免疫排斥和移植并发症等问题,因此,寻找能够减轻肝脏缺血再灌注损伤以及提高肝脏再生能力的安全有效的治疗办法是目前肝脏外科亟待解决的问题之一。脂肪间充质干细胞（ADSCs）能够自我更新、具有多向分化能力、来源丰富、取材损伤小,是目前细胞疗法理想的种子细胞。ADSCs主要依靠分化和旁分泌发挥作用,旁分泌指干细胞释放的多种生物因子在微环境里通过细胞基质在局部以及临近组织对靶细胞发挥的生物学作用。随着对旁分泌机制的深入研究,发现ADSCs分泌的多种细胞因子具有促进血管生成,抑制炎症反应,调节免疫应答,修复组织再生等多种生物学功能。ADSCs在体外培养的过程中,会将细胞因子等生物活性物质分泌到培养液中,这种含有细胞分泌物的培养液为脂肪间充质干细胞的条件培养液（ADSC-CM）。尽管ADSCs在临床上对许多疾病有治疗效果,但ADSCs具有免疫原性,对植入ADSCs的不可控分化仍是重要的安全隐患。因此,使用ADSC-CM的无细胞疗法成为绕过细胞疗法局限性的一种再生医学治疗方法。目前有关肝脏缺血再灌注损伤的动物模型以啮齿类动物为主,而从比较医学角度,小型猪与人的同源性好,体积大小以及器官大小与人更为接近,因此也作为研究缺血再灌注损伤理想的实验动物,所获得的研究数据更有价值,易于临床转化。而ADSC-CM在大型实验动物的研究较少,特别是肝脏领域尚未见报道,所以本研究旨在通过建立小型猪肝脏缺血再灌注合并部分切除模型,探究ADSC-CM治疗肝脏缺血再灌注合并部分切除损伤的疗效,为比较医学开展肝病治疗,拓宽ADSC-CM移植领域提供研究依据。本研究使用30头小型猪,其中6头用于脂肪组织的获取。采用胶原酶消化法分离培养ADSCs,使用诱导培养基和特定染色鉴定ADSCs成脂、成骨、成肝分化能力,应用细胞流式鉴定ADSCs表面特异性抗原。ADSCs饥饿培养48 h获得ADSC-CM,经3 kda超滤管离心浓缩ADSC-CM用于后续实验。另外24头小型猪随机分为四组:模型组（IRI）,DMEM对照组（DMEM）,脂肪间充质干细胞组（ADSCs）,脂肪间充质干细胞条件培养基组（CM）,每组6头。四组实验动物均通过腹腔镜手术建立肝脏缺血再灌注合并部分肝切除模型,IRI组通过肝实质注射生理盐水,DMEM组注射基础培养基,ADSCs组注射脂肪间充质干细胞,数量为1×106/kg,CM组按照1×106/kg细胞数提取等量干细胞分泌的条件培养液,注射浓缩的ADSC-CM进行干预。分别在术前、术后1 d、3 d、7 d采集血液样本及肝组织样本用于相关指标的检测。通过HE染色观察病理组织学变化,透射电镜观察超微结构的变化,血常规检测外周血的炎性细胞变化,试剂盒检测抗氧化酶以及细胞凋亡酶活性,TUNEL染色检测凋亡细胞的阳性率,ELISA法检测血清中炎症相关因子、再生相关因子以及ADSC-CM成分,q RT-PCR法检测炎症、凋亡以及再生相关基因水平变化,Western Blot法检测肝组织中凋亡以及再生相关蛋白水平的变化,免疫组化染色检测凋亡相关蛋白以及再生相关蛋白水平的变化。本研究结果如下:（1）病理组织学与超微结构变化:术后各组肝小叶结构被破坏,肝索排列紊乱,肝细胞空泡变性明显,炎性细胞浸润,相比于IRI组和DMEM组,ADSCs或ADSC-CM干预明显减少空泡变性和炎性细胞浸润;术后IRI组和DMEM组肝细胞内质网严重扩张,细胞核膜皱缩,染色质边集化,ADSCs或ADSC-CM干预改善了内质网扩张及肝细胞核膜皱缩的程度。（2）肝脏功能变化:术后各组ALT、AST、LDH、ALP和T-BIL均升高,TP呈降低趋势,相比于IRI组和DMEM组,ADSCs或ADSC-CM干预明显降低了ALT、AST、LDH、ALP和T-BIL的升高程度,缓解了TP的降低程度,促进肝脏功能的恢复。（3）氧化应激指标变化:术后各组肝组织抗氧化酶CAT、GSH-Px和SOD活性显着降低,MPO酶活性和MDA含量显着升高,相比于IRI组和DMEM组,ADSCs或ADSC-CM干预显着增强了抗氧化酶的活性,降低MPO酶活性,并能减少氧化产物MDA的水平,从而减少术后的氧化应激反应,且两个干预组的上述氧化应激指标均无显着性差异。（4）炎症指标变化:术后外周血中炎性细胞WBC、NE、LY含量迅速升高,ADSCs或ADSC-CM干预减少了外周血中的炎性细胞的数量;IRI组和DMEM组血清中的炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量呈升高趋势,ADSCs或ADSC-CM干预降低促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,同时增强抑炎因子IL-10的表达;肝组织中炎症因子基因水平的表达与血清结果一致,ADSCs和ADSC-CM通过抑制促炎因子的过度释放以及增强抑炎因子的表达显着改善了术后的炎症反应,且两个干预组之间没有显着性差异。（5）凋亡指标变化:术后各组P53、Bax、Fas、Fasl基因和蛋白水平均显着升高,Bcl-2表达水平降低,相比于IRI组和DMEM组,ADSCs或ADSC-CM干预抑制了凋亡相关指标P53、Bax,、Fas、Fasl的表达,提高抗凋亡Bcl-2的表达水平;ADSCs组和CM组显着降低TUNEL阳性细胞率及Caspase酶活性,减少术后肝细胞凋亡,且两组之间没有显着性差异。（6）再生指标变化:相比于IRI组和DMEM组,ADSCs或ADSC-CM干预显着提高血清中血管生成相关因子VEGF、ANG-1、ANG-2的表达,增强组织中肝脏再生相关基因HGF、Cyclin D1的表达,抑制肝再生终止基因TGF-β的表达,提高Ki67的阳性细胞数及细胞增殖PCNA蛋白的表达,且ADSCs组和CM组之间没有显着性差异。（7）ADSC-CM成分检测:通过ELISA法检测到小型猪ADSC-CM中含有促进血管生成的VEGF、ANG-1、ANG-2、b-FGF,调节炎症反应与肝脏再生的TNF-α、IL-1β、IL-6。综上所述,经肝实质移植ADSCs和ADSC-CM均能够改善肝脏缺血再灌注合并部分肝切除的病理组织学损伤及超微结构变化,减轻过度炎症反应及氧化应激反应,减少细胞凋亡,促进肝脏再生。本试验成功应用ADSCs和ADSC-CM干预肝脏缺血再灌注合并部分切除后的肝损伤,证明ADSCs和ADSC-CM抗氧化、抗炎、抗凋亡和促进肝再生的作用,且二者干预效果无显着差异,推测ADSCs发挥作用的机制很可能是通过分泌细胞因子的旁分泌途径。
罗雪梅[6]（2020）在《铅污染对水蛭及其抗凝血作用影响的代谢组学研究》文中研究说明研究目的水蛭防治心脑血管疾病的疗效显着,以水蛭为原料药的中成药逐渐增多。蚂蟥Whitmania pigra Whitman作为水蛭的主要来源之一,用量也越来越大。野生蚂蟥资源匮乏,人工养殖蚂蟥的出现解决了这一燃眉之急。但蚂蟥养殖环境的污染问题日益严重,致使蚂蟥体内铅（Pb）含量超标,严重影响水蛭药材的安全性与有效性。本课题旨在揭示铅污染对水蛭代谢及其抗凝血作用的影响,从代谢水平探究其影响机制,为保障水蛭药材的安全性与有效性提供理论基础。研究方法1.铅污染水蛭的养殖及其代谢组学研究:利用硝酸铅对养殖土壤进行不同浓度污染（高、中、低污染组）,在水族箱内模仿蚂蟥养殖环境对其进行为期50天的饲养,以获得被铅污染的水蛭药材。2.铅污染水蛭对凝血功能和血液流变的影响:（1）利用全自动凝血分析仪测定加入不同处理组水蛭提取液的兔血浆的APTT值和PT值,研究铅污染水蛭在体外对血浆凝血功能的影响。（2）使用皮下注射肾上腺素加冰水浴的方法建立大鼠急性血瘀模型,然后提取不同处理组水蛭药材,灌胃给药血瘀模型大鼠,通过采集大鼠血液进行凝血功能和血液流变学检测,研究铅污染对水蛭干预血瘀大鼠血液流变与凝血功能的影响。（3）利用全自动凝血分析仪测定空白大鼠和给药PbNO3大鼠的凝血功能,研究铅自身对大鼠凝血功能的影响。3.利用UPLC-Q/TOF-MS测定来自不同铅污染环境的水蛭组织样品,通过比较各组代谢物的差异,探究铅污染对水蛭的影响。4.基于代谢组学研究铅污染对水蛭抗凝血作用的影响:利用UPLC-Orbitrap-MS测定不同处理组SD大鼠的血浆,通过比较各组大鼠血浆代谢物的差异,探究铅污染对水蛭干预血瘀大鼠的影响。实验结果1.成功获得不同处理组水蛭样品:空白组（铅残留量:2.05 mg.kg-1）;铅低残留组（铅残留量:3.185 mg·kg-1）;铅中残留组（6.46 mg·kg-1）;铅高残留组（10.66 mg·kg-1）。2.不同处理组水蛭提取液对兔血浆APTT值和PT值影响的结果显示:与生理盐水组相比,水蛭提取液在体外能显着（P<0.05）延长兔血浆的APTT值;但是加入铅污染水蛭提取液的兔血浆的APTT值均比加入空白水蛭提取液的低,其中铅高残留组的APTT值与空白水蛭组存在显着性差异（P<0.05）;不同处理组水蛭提取液在体外对兔血浆的PT值无明显影响。利用全自动凝血分析仪测定各组大鼠的凝血功能的结果显示:血瘀模型组的APTT、PT和TT值均比空白对照组低,而FIB值较空白对照组高,其中PT值和FIB值在统计学上存在显着性差异（P<0.05）。无污染水蛭组和空白水蛭组的APTT值无显着性差异,而铅污染水蛭组与水蛭组的APTT值存在显着性差异。血瘀模型组与铅污染水蛭组的FIB值无显着性差异,无污染水蛭组与铅污染水蛭组的FIB值存在显着性差异。利用全自动血液流变测试仪测定各组大鼠的血液流变情况,结果显示:血瘀模型组和空白对照组的WBV200、WBV30和WBV3在统计学上存在显着性差异（P<0.05）;无污染水蛭组和空白对照组的WBV200、WBV30、WBV3和PV无显着性差异;铅污染水蛭组的WBV200、WBV30、WBV3和PV与血瘀模型在统计学上无显着性差异;无污染水蛭组与铅污染水蛭组的WBV200和WBV30存在显着性差异（P<0.05）。利用全自动凝血分析仪测定空白大鼠和给药Pb大鼠的凝血功能,结果显示空白大鼠和给药Pb大鼠的APTT、PT、TT以及FIB值均无显着性差异。3.水蛭组织代谢组学研究结果显示:空白水蛭组和铅污染水蛭组样本点完全分开,而且分开趋势呈剂量依赖性变化。总共寻找到24种差异代谢物,其中13种差异代谢物在铅低、中、高残留组中的变化存在剂量依赖性。代谢物大致分为磷脂、甘油三酸酯、核苷酸、二肽等类别,主要涉及能量代谢、脂质代谢、核酸代谢,蛋白质分解等。4.利用代谢组学技术检测各组大鼠血浆,并对各组大鼠血浆样本数据进行模式识别分析,结果显示:空白对照组和血瘀模型组样本点完全分开,无污染水蛭组和与血瘀模型组分离,有向空白组靠近的趋势;铅污染水蛭组与血瘀模型组样本点混合在一起,无法分离。在血浆样本中筛选出与血瘀证相关的差异代谢物25个,主要涉及苯丙氨酸,酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢,花生四烯酸代谢,组氨酸代谢等代谢通路。采用水蛭干预后,一半以上的代谢物表现出向对照组回调的趋势,而铅污染水蛭组没有出现上述回调趋势。结论水蛭能通过增强凝血功能、改善血液流动不畅发挥抗凝血作用。与之相反,铅污染水蛭即不能增强凝血功能,也不能改善血液流动性,因而无法发挥抗凝血作用。铅自身不会对大鼠的凝血功能产生影响。水蛭组织代谢物与其抗凝血作用密切相关。铅污染会导致水蛭的脂质过氧化、基因损伤和蛋白质分解,水蛭的自我保护作用是促进细胞膜的修复和DNA及RNA的修复,并激活抗氧化剂水平。水蛭通过调节血瘀证大鼠的花生四烯酸代谢、苯丙氨酸的合成与代谢、组氨酸代谢、谷氨酰胺代谢等代谢途径,改善血瘀证大鼠的能量代谢、增强其免疫力,产生抗炎作用,缓解和治疗血瘀证。与之相反,铅污染水蛭不能调节上述代谢物与代谢通路,无法缓解及治疗血瘀证。创新点首次利用代谢组学研究铅污染对水蛭组织代谢物的影响。首次利用代谢组学研究铅污染对水蛭干预血瘀大鼠的影响。
徐安然[7]（2019）在《医用胶对兔积液子宫的栓堵效果及组织学研究》文中研究说明研究背景和目的体外受精-胚胎移植（IVF-ET）过程中,输卵管炎性病变如积液等可能影响宫腔环境及子宫内膜容受性,降低胚胎着床率和临床妊娠率,增加自然流产率和异位妊娠率。研究显示,IVF-ET前对积液输卵管进行处理,如手术结扎、切除输卵管或穿刺抽吸积液等,患者的继续妊娠率远高于未行任何干预的女性。目前,常规的积液输卵管处理方式有:开腹或腹腔镜下输卵管切除术、输卵管近端结扎术、输卵管远端造口术及阴道超声引导下输卵管积液穿刺抽吸术等。这些方法各有利弊,主要弊端有,切除或结扎输卵管可能因血管神经的损伤而影响卵巢功能,输卵管造口术和积液抽吸术容易复发;有些患者因各种原因不适合手术治疗等。本研究即探讨一种非手术处理积液输卵管、不影响卵巢功能、复发率低的方法。设定研究方向为采用一种新型配方的医用胶,通过栓堵方式阻断输卵管与子宫的交通,去除输卵管积液对胚胎着床的不利影响。关于IVF-ET前积液输卵管的栓堵,尚不属于常规处理方法,多为介入下机械性栓堵物如微弹簧圈的栓堵等。将此医用胶用于IVF-ET前积液输卵管的栓堵未见报道。为验证其有效性及安全性,本研究为前期动物实验。选择与人类输卵管管腔大小结构相近的新西兰兔子宫为研究对象,先通过注菌方式建立兔子宫积液模型,再应用α-氰基丙烯酸酯医用胶,对兔的积液子宫进行栓堵。术后通过子宫输卵管造影评价医用胶对兔积液子宫的堵塞效果,并观察栓堵后子宫、输卵管及卵巢的组织形态学变化、进行组织的免疫组化检测、凋亡检测和电镜观察等,评价此医用胶的栓堵效果及对兔子宫等器官组织的影响,以期为临床上IVF-ET前积液输卵管的处理提供实验依据。方法选择新西兰成年雌兔作为实验动物,建立兔子宫积液模型,再对积液子宫进行医用胶栓堵。为摒除兔动情周期不同时期激素对所观察指标的影响,对所有兔进行外阴粘膜观察和阴道脱落细胞学观察,判定动情周期,将研究的取材时间设定在兔的动情初-中期阶段。1.兔子宫积液模型的建立通过从兔阴门插管至阴道、宫颈及宫腔并开腹观察辅助的方式,向宫腔内注入菌液,建立兔子宫积液模型。所注菌液分别为1.5 ×108/ml金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液及1:1混合的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液;术后观察时间分别为1周、2周和3周。通过对不同时间积液子宫的大体形态学、组织学观察及肌层厚度比较,确定合适的菌液和观察时间建立兔子宫积液模型。2.医用胶栓堵兔积液子宫选择35只双侧子宫积液形成良好的兔,随机分为实验组（23只）和对照组（12只）,另取12只正常兔（无子宫积液）作为空白对照组。通过兔阴门插管至阴道、宫腔并开腹辅助的方法,对兔积液子宫的近端进行医用胶栓堵。对照组和空白对照组仅行插管手术,不进行医用胶栓堵。每组再分为2个亚组,分别于术后1个月、6个月与术前比较体重变化;术后1个月、6个月实验组和对照组兔均行子宫输卵管造影检查,进行子宫腔栓堵率的比较。术后1个月和6个月,实验组分别各处死3只兔（均为双侧子宫腔均栓堵成功的兔）;对照组和空白对照组各处死2只兔。观察子宫、输卵管和卵巢的组织学改变、比较子宫肌层厚度等。术后6个月兔再进行组织的雌孕激素受体测定和比较、凋亡检测及透射电镜观察等,以此综合评价医用胶对子宫腔的栓堵效果及对子宫等器官组织学变化的影响。结果1.兔子宫积液模型的建立造模成功的兔子宫明显扩张,内膜及肌层变薄,见炎细胞浸润。子宫肌层厚度,术后1周与术后2周和3周比较,均有统计学差异;术后2周与术后3周比较,无统计学差异。术后2周子宫积液形成程度可以满足实验要求。结合注入菌液情况,认为注入1.5×108/ml金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌1:1混合菌液组,于术后2周可建立良好的子宫积液模型。2.积液子宫的医用胶栓堵（1）兔存活情况及体重变化:35只子宫积液兔中成功进行医用胶栓堵手术且术后正常存活的有31只,实验组20只,对照组11只。两组死亡率无统计学差异;术后1个月和6个月,实验组和对照组兔体重均有增加,两组比较均无统计学差异。实验组术后1个月及6个月分别与术前体重比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）子宫输卵管造影:实验组术后1个月,子宫堵塞率95.00%;术后6个月,子宫堵塞率85.00%。对照组术后1个月和6个月,堵塞率为0。实验组和对照组比较,子宫堵塞率有统计学差异（P<0.05）。实验组不同时间点组内比较,子宫堵塞率无统计学差异。（3）大体观察:对照组积液子宫增粗,扩张;输卵管及卵巢无明显改变。实验组栓堵即时子宫腔略增粗,表面光滑;术后1个月,栓堵部位长度略缩小,皱缩质硬,子宫腔内见胶聚合体;术后6个月,栓堵部位子宫明显皱缩;输卵管卵巢无明显改变;积液部位子宫无明显改变。（4）组织形态学:分别观察空白对照组正常子宫、对照组积液子宫、对照组积液部位近端子宫、实验组栓堵部位子宫、实验组栓堵部位近端子宫等。子宫:对照组术后1个月和6个月,积液子宫明显扩张,内膜变薄,内膜下见炎细胞浸润。积液部位近端子宫,子宫内膜明显增厚,内膜固有层内血管扩张、充血,内膜上皮下可见散在的炎细胞浸润。实验组栓堵后1个月,栓堵部位子宫腔扩张,腔内可见大量丝网状物（胶聚合体）,粘膜上皮见紊乱的复层上皮细胞、或有局部上皮缺失,见少量炎细胞浸润及纤维化。栓堵部位近端子宫,子宫内膜呈单层立方状上皮,固有层散在极少量嗜酸性粒细胞,未见明显病理学改变。实验组栓堵后6个月,栓堵部位镜下结构杂乱模糊,子宫内膜正常结构消失,无明显上皮组织,见肉芽组织增生及纤维化。栓堵部位近端子宫,术后1个月与术后6个月的组织形态学类似,均无明显病理学改变。子宫肌层厚度比较,实验组术后1个月,子宫肌层变薄,与术后6个月比较有统计学差异（P<0.05）;术后1个月实验组与对照组比较有统计学差异（P<0.05）,术后6个月无统计学差异。余无明显病理学变化。输卵管:对照组和实验组,输卵管外膜血管扩张、充血,腔内见少量炎细胞浸润等。余无明显病理学变化。卵巢:各组均无明显病理学改变。（5）雌孕激素受体（ER、PR）测定与凋亡检测:子宫ER、PR测定及凋亡检测显示,积液子宫、栓堵部位子宫、积液部位近端子宫ER表达减弱,PR表达增强;凋亡表达增强。正常子宫与积液子宫、正常子宫与栓堵部位子宫、正常子宫与积液部位近端子宫ER、PR测定平均光密度值、凋亡检测平均光密度值均有统计学差异,栓堵部位近端子宫与积液部位近端子宫ER比较有统计学差异;其余比较均无统计学差异。输卵管ER、PR测定及凋亡检测显示,与空白对照组输卵管比较,实验组输卵管ER表达减弱,平均光密度值测定有统计学差异;对照组和实验组输卵管PR表达均增强,与空白对照组比较平均光密度值测定均有统计学差异。其余比较均无统计学差异。凋亡检测平均光密度值均无统计学差异。卵巢ER、PR测定及凋亡检测显示,各组比较均无统计学差异。（6）透射电镜观察:积液子宫显示上皮细胞肿胀、微绒毛缺失,细胞器如线粒体等出现空泡化。栓堵后子宫,结构紊乱,细胞核染色质减少、呈核溶解状态,可见吞噬细胞等。对照组和实验组输卵管细胞器如线粒体、内质网等轻微空泡化。各组卵巢各类细胞和细胞器结构清晰正常,偶见线粒体损伤。结论1.通过阴道插管并开腹手术辅助的方式向兔子宫腔内注入1.5×108/ml的1:1混合的金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌菌液,2周左右时间可建立较为稳定的子宫积液模型。2.医用胶能有效栓堵兔积液子宫,对兔健康存活无不良影响;栓堵对兔子宫的主要影响即栓堵部位的组织压迫及粘连改变,对周围组织及器官无明显有害影响;栓堵后子宫、输卵管及卵巢的组织学、免疫组化、凋亡及电镜观察结果显示,栓堵不影响受体表达,可以有效去除积液对宫腔的不良影响,有利于宫腔环境的改善;栓堵对卵巢无明显影响。3.兔子宫与人类输卵管的管腔大小和组织结构相近,故兔子宫可以作为人类输卵管的研究模型。对医用胶栓堵兔子宫可行性、有效性和不良影响的研究显示,医用胶用于人类IVF-ET前积液输卵管的栓堵具有可行性。
李元[8]（2019）在《胶原与类胶原基质用于构建成骨材料的初步研究》文中指出胶原（Collagen）是骨的重要组成成分,正常骨组织中胶原含量约达20%,胶原蛋白是具有三重螺旋结构的纤维状蛋白,不溶于水,在体内环境下,胶原成分稳定,参与构成细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）并且是细胞外基质中最重要的纤维蛋白。胶原所形成的半晶体状纤维稳定存在于细胞外基质中,作为骨架结构,为细胞的结构提供必要的抗张力和一定的弹性支持,并能在细胞迁移、增殖和分化的全过程中发挥重要的作用。I型胶原（Collagen type I,COL-I）是骨细胞外基质的主要组成部分,对骨细胞功能行使和维持有重要作用,在近数十年来兴起的组织工程与再生医学研究和应用中,I型胶原是最为常用的天然来源骨组织工程支架,具有疏松多孔结构以及良好的渗透性和亲水性,也是诸如成骨细胞、成纤维细胞的理想支架材料,利于细胞附着,并可促进其进一步生长、分化,植入体内后,可逐步转化为正常组织。I型胶原常以海绵、细胞膜片或凝胶等形式用于组织工程中,其强度很低,植入体内会很快降解吸收,在较大范围骨缺损修复、或需要有负载能力的植骨材料时,单纯胶原难以达到要求,要使人工骨再生及骨生物重建成为可能,根据颌面部骨骼形态结构和功能成分构建组织工程核心环节的生物材料就要有更高的要求。本课题组前期研究中,采用自固化磷酸钙（Calcium phosphate cement,CPC）模拟天然骨无机成分构建组织工程骨替代材料,其最大优势主要在于它具有足够的负载强度,能够作为一种支撑材料承受一定的压力,并且在形态学方面,CPC固化前可塑性较强,可以任意塑形填充不规则骨缺损;同时,CPC还具有骨引导活性,生物相容性与安全性俱佳,是一种可承载生物活性分子的理想无机载体。但其缺点也较为突出,在成骨方面,CPC尚缺乏骨诱导活性,不能自行成骨;生物活性方面,CPC在机体内的降解速度常无法与正常骨组织的新陈代谢同步。为了解决上述无机材料的相关问题,我们根据仿生医学研究技术,选择胶原构建不同组合模式的胶原-CPC复合材料,利用胶原的渗透性、亲水性,提高复合组织工程支架材料的孔隙率和孔隙直径,并参与构成细胞外基质,对其的生物力学等理化性能进行体外测试,对其生物学特性通过体内组织学研究进行探索,望能够明确胶原用于构建CPC为基础的骨再生复合材料支架的有效方式,复合材料在体内向成骨方向转化。目前用于基础研究使用的胶原材料多为异种动物来源,在材料处理方面存在保存生物活性与消除组织抗原性和病原性之间的矛盾,常导致成骨能力不稳定,是限制其临床应用特别是大型复杂骨缺损修复应用的主要原因。如何获取具有更好活性和安全性的同种人源性胶原或类胶原材料,成为我们研究的一个重要方向。在课题组前期研究基础上,我们提出以自组装类胶原多肽RAD16-I和生物活性因子神经递质多肽小分子P物质（Substance P,SP）来构建新型复合水凝胶支架材料,使用人脐带组织来源的间充质干细胞（Human umbilical cord mesenchymal stromal cells,hUCMSCs）作为种子细胞,构建类胶原-干细胞复合物,通过神经递质多肽P物质诱导成骨的生物活性,体外长时间立体诱导培养干细胞,观察RAD16-I/SP/hUCMSCs复合体的生物学特征、成骨分化表型、组织学结构等,初步探索体外人工构建人源性类胶原活性复合体替代动物源性I型胶原的可行性。第一部分:胶原改善自固化磷酸钙材料生物活性的可行方法目的:探索胶原作为有机成分改善磷酸钙材料成骨生物活性并构建人工支架材料的可行方法。方法:制备鼠尾I型胶原蛋白（COL-I）冻干海绵以及神经多肽递质P物质（SP）溶液,与自固化磷酸钙（CPC）粉末构建单纯CPC组（A组）作为对照组、CPC/SP组（B组）、CPC/COL-I组（C组）和CPC/SP/COL-I组（D组）作为实验组共4组不同模式的CPC及其复合材料,并通过XRD、SEM等检测方法对各组材料就固化时间、物相成分、超微结构、力学性能等方面进行体外检测分析;根据前期实验结果,选择CPC/SP/COL-I复合材料作为实验材料,单纯CPC作为对照材料,辅助种植体植入兔股骨骨缺损,8周后观察种植体骨结合情况。结果:C组、D组复合材料的初始固化时间与终末固化时间与A组、B组相比均有所延长,且初始固化时间A组、B组分别与C组、D组存在统计学差异（P<0.05）。CPC及其复合材料支架的XRD分析示,加入COL-I和SP未改变CPC的物相成分和主体结构,也未引入其他无机物成分。结合复合材料的扫描电镜观察,在引入COL-I材料混合前,CPC固化后颗粒之间的孔径较小,约为10-15μm,但在复合COL-I后由于材料的结构排列及结合方式改变,增大了材料的孔隙直径至70μm。通过对各组复合材料的压缩强度和弹性模量测定研究发现,在复合材料完全固化并充分干燥后,C组、D组的压缩强度较A组、B组略有降低,但各组之间压缩强度对比无统计学差异（P>0.05）。通过COL-I材料的复合,C组、D组复合材料的弹性模量分别较A组、B组有所降低,结果具有统计学差异（P<0.05）。动物实验硬组织标本切片染色结果示,单纯CPC组中种植体周围材料未完全降解,骨缺损区未见明显新骨生成;CPC复合材料组可见材料已完全降解,并被较为成熟的骨小梁替代,种植体形成骨结合愈合,骨缺损区消失。结论:复合胶原的CPC材料具有更为理想的微观孔隙形态和直径,并可以在一定程度上模拟松质骨的生物力学和形态结构特征,胶原和活性多肽SP的加入对CPC的物相构成、晶体结构未产生明显影响,可以有效改善CPC材料的生物活性与降解速率,在体内能够于较短的时间内诱导引导新骨再生,是一种构建活性成骨支架材料的可行方法。第二部分:采用自组装多肽复合hUCMSCs构建类骨胶原基质的研究目的:利用自组装多肽RAD16-I复合SP多肽并接种hUCMSCs进行体外立体培养,观察复合体向骨胶原转化的表现,探索体外构建人源性可注射类胶原活性基质的可行性。方法:采用酶消化法获取人脐带组织沃顿胶内的间充质干细胞并对细胞表面标识分子进行免疫荧光及流式细胞术鉴定;对hUCMSCs进行成骨向和成脂向分化诱导,使用茜素红和油红O染色观察细胞分化情况。将hUCMSCs分别进行平面培养（2D培养组）与立体培养（3D培养组）,加入完全培养基的平面培养组标记为Control组作为对照,加入含有1×10-8M SP完全培养基的平面培养组标记为SP组;利用自组装类胶原多肽RAD16-I构建一种类骨胶原基质环境进行三维立体培养组标记为RAD16-I组,加入含有1×10-8M SP完全培养基的立体培养组标记为RAD16-I/SP组;以上4组分别培养1-4w,对各组进行细胞增殖、细胞活力、成骨相关基因表达测定、组织学特征观察、可注射性等相关研究,以注射方式将自组装多肽-干细胞复合物与CPC混合,观察复合材料超微结构及hUCMSCs生长情况。结果:通过原代培养得到的人脐带间充质干细胞,细胞形态为长梭形,生长状态良好,经免疫荧光测定细胞纯度达90%以上,流式细胞仪检测鉴定干细胞表面抗原标记物CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性,造血细胞标记物CD34、CD45、CD106表达阴性,鉴定为hUCMSCs。hUCMSCs成脂诱导培养4w后镜下观察实验组形成明显脂滴,对照组无明显脂滴形成;hUCMSCs成骨诱导培养4w后镜下观察实验组形成矿化结节,对照组无明显矿化结节形成。倒置显微镜40倍镜下观察类骨胶原基质内培养的hUCMSCs,立体培养组细胞接种后早期呈团装聚集,随后逐渐伸展,细胞逐渐增多,呈长梭形或不规则多边形。CCK-8法细胞增殖测定各组细胞在1d、2d、3d、5d、7d的OD值进行对比发现,空白对照组的细胞增殖率在各时间点最低,各组细胞均在3-5d呈对数增长,7d时其余三组细胞增殖情况优于空白对照组,且具有统计学差异（P<0.05）,三组组间未见统计学差异。活/死细胞荧光染色结果显示1-7d时各组细胞普遍呈现绿染,表明多数为活细胞,且细胞数量逐渐增多,细胞形态逐渐伸展,呈长梭形或者不规则多边形,仅极少量细胞红染,活细胞百分比始终处于较高的状态。实时定量PCR结果显示,hUCMSCs连续培养4w时,平面培养SP组与立体培养SP/RAD16-I组的成骨相关基因ALP、OCN、RUNX-2、COL-1表达均显着高于其余2组。培养4w后立体培养组及含SP的平面培养组茜素红染色有矿化表现。组织学观察立体培养组细胞呈团块状聚集,细胞周围具有类骨胶原基质环境,相较于平面培养组细胞体积面积更大。立体培养组中的细胞-类胶原基质复合体经注射后活细胞数量占90%以上;与CPC复合固化后,材料具有与实验一获得材料相似的微观孔隙形态结构,并且细胞可紧密黏附于复合材料中,生成状态良好。结论:采用I型胶原酶消化法可成功从人脐带组织获得hUCMSCs,经成骨诱导液及成脂诱导液进行细胞多向诱导分化培养证实hUCMSCs具有多向分化功能和潜力。hUCMSCs能够在由自组装类胶原多肽构建的类骨胶原基质立体培养系统内稳定地生长、增殖和迁移并较传统二维平面培养更加活跃和高效,成骨标志基因表达水平也较平面培养组更高。RAD16-I多肽作为立体培养/移植系统能与SP多肽组合,共同促进种子干细胞的生长、增殖及分化,共同构建保持活性状态的类胶原基质,并具有可注射性和自组装性,RAD16-I/SP/hUCMSCs组合可作为再生医学中应用于临床前期研究的类胶原组织工程材料。
张青[9]（2019）在《乳牙牙髓干细胞聚合体来源外泌体在牙髓再生中的作用研究》文中研究表明研究背景:目前,牙髓炎及牙髓坏死的发病率呈现出逐年增高的趋势。临床对于治疗严重牙髓病变的主要方式——根尖诱导成形术和根管治疗——并不能完全恢复牙齿的功能。随着近年来干细胞与组织工程技术的发展,牙髓再生成为解决严重牙髓病变的新型治疗方法。同时人乳牙牙髓干细胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）及细胞聚合体技术的应用很大程度上提高了牙髓再生的效率。在前期实验中,SHED聚合体分别被应用于小型猪年轻恒牙牙髓再生的动物实验,以及人年轻恒牙和根尖已闭合的恒牙牙髓再生的临床实验中。但是只在小型猪和人的年轻恒牙中取得了良好的牙髓再生效果,根尖已闭合的恒牙并未取得良好的疗效。这极有可能与根尖已闭合的恒牙根尖孔狭窄血供不足无法供给足够的营养用于组织再生有关。外泌体（Exosomes）是由细胞分泌并可以被周围细胞摄取利用的微小囊泡,其不仅可以运输蛋白,特异性靶定受体细胞,交换蛋白和脂类以及引发下游信号通路;同时也可以运输包括微小核糖核酸（micro ribonucleic acid,miRNA）在内的多种核酸,对血管、神经等组织器官再生均具有促进作用。研究表明,牙髓干细胞单细胞来源的Exosomes对细胞牙源性分化所需基因的表达以及牙髓再生均具有促进作用。研究表明,不同细胞分泌的Exosomes以及同一细胞在不同状态下分泌的Exosomes均存在差异,那么细胞处于聚合体状态下和处于单细胞状态下所分泌的Exosomes是否存在差异;如果存在差异,此差异是否是造成聚合体牙髓再生效果优于单细胞的原因之一尚未见报道。研究目的:本课题拟通过比较聚合体及单细胞来源Exosomes的差异,以从Exosomes角度探究聚合体牙髓再生效果优于单细胞的原理及机制,进而寻找根尖已闭合恒牙牙髓再生的临床治疗方法,同时也为其他组织再生研究提供新的思路。研究方法:1.SHED的分离、培养和鉴定:本实验使用胶原酶消化法以及差异贴壁法分离并纯化SHED;采用流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志物;甲苯胺蓝染色检测细胞集落形成能力;甲基噻唑基四唑检测细胞生长曲线;成骨、成脂诱导检测细胞多向分化潜能。2.Exosomes提取鉴定及miRNA数据采集信息分析:通过超速离心法提取Exosomes,通过透射电镜观察Exosomes形态和大小、粒径检测分析Exosomes直径大小、流式细胞术检测Exosomes表面标志物对Exosomes进行鉴定;利用BGISEQ-500测序技术对Exosomes所含miRNA进行测序,将数据与第22版的miRBase数据库进行比对。3.不同来源Exosomes对SHED生物活性及成血管神经能力影响的比较:利用细胞增殖检测试剂盒及流式细胞术检测Exosomes对SHED增殖和凋亡的影响;通过成骨成脂诱导实验检测Exosomes对SHED多向分化潜能的影响;通过实时定量聚合酶链反应检测Exosomes对SHED分泌血管、神经营养因子能力的影响。4.裸鼠背部皮下异位移植牙髓再生体内实验:临床收集患者脱落恒切牙,制备全长牙根;抑制Exosomes SHED聚合体、SHED聚合体、促进Exosomes SHED聚合体分别与全长牙根复合后植于裸鼠背部皮下;3个月后处死裸鼠,取出聚合体牙根复合体并脱钙切片染色,通过苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin stain,HE）观察再生牙髓组织结构、通过牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）免疫组化染色观察成牙本质细胞层（odontoblast layer,OL）再生情况、通过CD31免疫荧光染色观察血管再生情况、通过S100免疫荧光染色观察神经再生情况。5.小型猪恒牙牙髓腔原位移植牙髓再生临床前实验:拔除小型猪原有牙髓,将抑制Exosomes SHED聚合体、SHED聚合体、促进Exosomes SHED聚合体植入小型猪牙髓腔中;6个月后处死小型猪,拔除牙齿,通过微计算机断层扫描技术扫描牙齿并对牙齿进行三维重建;通过HE染色观察再生牙髓组织结构、通过DSPP免疫组化染色观察OL再生情况、通过CD31免疫荧光染色观察血管再生情况、通过S100免疫荧光染色观察神经再生情况。研究结果:1.分离纯化后的SHED呈长梭形;间充质干细胞表面标志物呈阳性、而造血干细胞细胞表面标志物呈阴性;细胞具有良好的自我更新能力和多向分化潜能。2.SHED单细胞及SHED聚合体来源Exosomes均呈茶托样或凹半球样,直径均在100 nm左右;单细胞来源Exosomes颗粒主峰小于聚合体来源Exosomes,但二者平均粒径较一致;Exosomes表面标志物均呈阳性;聚合体来源Exosomes中抑制细胞凋亡和促进血管、神经修复再生的miRNA表达量高于单细胞来源Exosomes。3.Exosomes对于SHED增殖无影响,但可以抑制SHED凋亡;并可以促进SHED多向分化及分泌血管、神经营养因子,且聚合体来源Exosomes效果优于单细胞来源Exosomes。4.Exosomes可以促进异位移植形成的牙髓组织中的SHED向成牙本质细胞、血管内皮细胞和神经细胞分化,且聚合体来源Exosomes效果优于单细胞来源Exosomes。抑制Exosomes会造成再生牙髓组织出现坏死。5.小型猪牙髓腔内原位移植入人SHED聚合体未出现排异反应。Exosomes可以促进原位再生牙髓组织结构形成、OL再生、血管再生和神经再生,且聚合体来源Exosomes效果优于单细胞来源Exosomes。再生血管与神经相伴行;聚合体来源Exosomes可以促进再生主血管两侧再生出形态连续的神经组织。抑制Exosomes则会造成再生牙髓组织出现钙化。结论:1.聚合体来源Exosomes中大直径颗粒较单细胞来源Exosomes多;聚合体来源Exosomes中抑制细胞凋亡和促进血管、神经修复再生的miRNA表达量高于单细胞来源 Exosomes。2.Exosomes可以抑制SHED凋亡并促进SHED多向分化及分泌血管、神经营养因子,且聚合体来源Exosomes效果优于单细胞来源Exosomes。3.Exosomes可以促进小型猪牙髓腔原位移植和裸鼠背部皮下异位移植牙髓组织再生,且聚合体来源Exosomes效果优于单细胞来源Exosomes。聚合体来源Exosomes可以显着促进血管、神经再生。SHED聚合体联合SHED聚合体来源Exosomes可被用于根尖已闭合恒牙牙髓再生的临床治疗。
郭海林[10]（2019）在《扩张器包膜培育带蒂血管化工程组织瓣的研究》文中提出背景和目的:组织工程技术历经百余年发展有了很大进步,但至今未能有效解决组织工程研究中的血管化构建难题。因此体外构建的组织植入体内后因不能及时得到充足血供,故而可萎缩,难以成行。前期研究发现,扩张器包膜可作为血管床支持细胞和游离移植皮片的存活。故本研究拟探讨应用扩张器包膜作为血管床培育带蒂血管化工程组织瓣用于膀胱及尿道重建,以期为组织工程血管化构建提供新方法。材料与方法:1.在新西兰大白兔腹股沟皮下股动静脉分支血管旋髂浅动静脉旁埋置扩张器,并间歇性打水扩张,扩张器注水完成后1周行墨汁灌注实验,观察扩张器包膜的血管化程度并行组织学染色。2.取兔子口腔黏膜（颊黏膜）,将颊黏膜固定于轴心血管包膜前方,将注满水的扩张器紧贴口腔黏膜重新放回包膜内以促使口腔黏膜可尽快地与包膜取得血运联系。1月后观察口腔黏膜在扩张器包膜上的存活情况及组织学变化特点。3.待口腔黏膜与扩张器包膜建立充分血运联系后（口腔黏膜移植至轴心血管包膜1月）,更换更大的扩张器并给予更大的扩张刺激,观察口腔黏膜是否可随扩张器扩张刺激的增大而使其面积增加。4.建立尿道缺损模型,将扩张器包膜培育的含轴心血管的内衬口腔黏膜的组织瓣以旋髂浅动静脉为血管蒂进行尿道替代修复重建,观察修复重建后的效果。5.心脏穿刺抽取兔子外周血,分离提取内皮祖细胞;同时行膀胱逼尿肌取材,分离培养平滑肌细胞。将平滑肌细胞和内皮祖细胞以6:1比例共培养以收获预血管化的平滑肌细胞膜片。把3张预血管化的平滑肌细胞膜片组织叠加,并用PET膜将3张叠加的预血管化的平滑肌细胞膜片组织移植至轴心血管包膜内,2天后再将另外3张叠加的预血管化的平滑肌细胞膜片组织移植至已经血管化的细胞膜片组织上方,1月后观察6张细胞膜片组织的血管化程度和组织学特点。6.创建膀胱逼尿肌缺损模型,以旋髂浅动静脉为血管蒂将扩张器包膜培育的血管化的平滑肌组织瓣移植至膀胱逼尿肌缺损区,1月和3月后观察扩张器包膜培育的血管化的平滑肌组织瓣用于膀胱修复的效果。结果:1.扩张器注水完成后1周可形成血管化良好的包膜组织,墨汁灌注见包膜内富含小血管。2.口腔黏膜与扩张器包膜贴附良好,将注满水的扩张器重新放回扩张器包膜内1月后,口腔黏膜与扩张器包膜可建立良好血运,口腔黏膜存活良好。行墨汁灌注实验见口腔黏膜黏膜层下方有墨汁灌注。对包膜-口腔黏膜行组织学分析,1月后未见口腔黏膜组织学有明显改变。3.待口腔黏膜与扩张器包膜建立充分血运联系后,更换更大的扩张器并给予更大的扩张刺激,可见口腔黏膜面积可随扩张器扩张刺激的增大而增加。4.将扩张器包膜培育的含轴心血管的内衬口腔黏膜的组织瓣用于尿道缺损替代重建后,可见重建段尿道管腔通畅,管腔面全部为口腔黏膜内衬。5.内皮祖细胞呈铺路石样外观,平滑肌细胞呈梭形。二者以6:1比例共培养,8天后可收获预血管化的平滑肌细胞膜片组织。平滑肌细胞膜片组织可用机械法完成叠加。将3张叠加的预血管化的平滑肌细胞膜片组织移植至轴心血管包膜后2天可见平滑肌细胞膜片组织内有较多微血管长入,平滑肌细胞膜片组织存活良好。2天后见另外3张叠加的预血管化的平滑肌细胞膜片组织移植至已经血管化的平滑肌细胞膜片组织上方,2天后可见新移植的细胞膜片组织内有微血管长入,新移植的细胞膜片组织亦存活良好。1月后见6张平滑肌细胞膜片组织内微血管丰富,细胞膜片组织全部存活。6.扩张器包膜培育的6张平滑肌细胞膜片组织可以旋髂浅动静脉为血管蒂移植至膀胱肌层缺损区,平滑肌细胞膜片组织存活良好,组织内微血管丰富。结论:1.扩张器包膜可作为血管床支持口腔黏膜片存活,扩张器包膜培育的含轴心血管的内衬口腔黏膜的组织瓣可用于卷管替代尿道成形。2.扩张器包膜可作为血管床支持平滑肌细胞膜片组织存活,构建的厚层含轴心血管的平滑肌组织瓣可用于膀胱肌层缺损修复。
二、华牧安全健康蛋课题通过鉴定（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、华牧安全健康蛋课题通过鉴定（论文提纲范文）
（1）小型猪四肢荧光素钠循经迁移及运动对迁移影响的观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 国际上近十年来对组织液研究的概况 |
| 参考文献 |
| 综述二 不同因素对组织液流动影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 |
| 一 前言 |
| 二 实验研究 |
| 实验一 小型猪循经低电阻线测定及荧光素钠注射参数的筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 研究方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 小型猪四肢十二条循经低电阻线的分布 |
| 2.2 不同参数荧光素钠溶液注射后的比较 |
| 3 讨论 |
| 实验二 小型猪四肢荧光素钠循经迁移特征的观察 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 研究方法 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 低电阻点组及旁开组注射荧光素钠后的体表迁移轨迹观察 |
| 2.2 低电阻点组与旁开组荧光素钠体表迁移图像的比较 |
| 2.3 低电阻点组荧光素钠体表迁移线与循经低电阻线的吻合度分析 |
| 2.4 荧光素钠体表迁移轨迹与浅表静脉位置的比较 |
| 2.5 低电阻点组未出现荧光素钠体表迁移轨迹解剖观察 |
| 2.6 后肢内侧出现的多条平行荧光素钠迁移轨迹 |
| 2.7 荧光素钠沿循经低电阻线迁移轨迹的横切面观察 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 四肢低电阻点注射荧光素钠后的体表循经迁移规律 |
| 3.2 荧光素钠的体内循经迁移规律 |
| 3.3 经络的间质通道生物学内涵 |
| 实验三 运动对小型猪四肢荧光素钠迁移轨迹的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物及饲养方法 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 观察指标 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 小型猪在麻醉、清醒、运动三种状态下的心率比较 |
| 2.2 麻醉、清醒、运动三种状态下荧光素钠迁移轨迹的比较 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 全文总结与展望 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）基于红外图像奶牛发情信息监测装置的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究意义 |
| 1.3 奶牛发情检测方法 |
| 1.3.1 人工检测方法 |
| 1.3.2 数字化检测方法 |
| 1.4 国内外研究现状 |
| 1.4.1 国外研究现状 |
| 1.4.2 国内研究现状 |
| 1.5 存在的主要问题 |
| 1.6 主要研究内容及技术路线 |
| 1.6.1 主要研究内容 |
| 1.6.2 技术路线 |
| 1.7 本章小结 |
| 2 奶牛发情信息监测装置介绍 |
| 2.1 保定装置介绍 |
| 2.2 保定装置的设计 |
| 2.3 奶牛发情信息监测装置硬件介绍 |
| 2.3.1 RFID识别器 |
| 2.3.2 称重传感器 |
| 2.3.3 红外测温仪 |
| 2.3.4 滚珠丝杠滑台 |
| 2.3.5 触摸屏 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 奶牛发情信息监测装置硬件的设计 |
| 3.1 监测装置方案的确定 |
| 3.2 可编程控制器 |
| 3.2.1 PLC概述 |
| 3.2.2 PLC选型 |
| 3.2.3 I/O分配 |
| 3.3 RFID的选择 |
| 3.4 称重传感器的选择 |
| 3.5 红外测温仪的选择 |
| 3.6 本章小结 |
| 4 奶牛发情信息监测装置软件设计 |
| 4.1 PLC程序设计 |
| 4.1.1 主控程序的设计 |
| 4.1.2 自动程序的设计 |
| 4.1.3 手动程序的设计 |
| 4.1.4 步进电机控制子程序 |
| 4.2 人机交互界面设计 |
| 4.2.1 画面设计 |
| 4.2.2 主窗口设计 |
| 4.2.3 系统界面设计 |
| 4.2.4 手动模式设计 |
| 4.2.5 自动模式设计 |
| 4.2.6 曲线窗口 |
| 4.3 设备通讯 |
| 4.3.1 MCGS与 PLC通讯 |
| 4.3.2 触摸屏与体重信息设备通讯 |
| 4.3.3 触摸屏与RFID通讯 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 装置的调试 |
| 5.1 RFID调试 |
| 5.2 称重传感器的标定 |
| 5.3 红外测温仪的调试 |
| 5.4 装置的整体调试 |
| 5.5 本章小结 |
| 6 总结与展望 |
| 6.1 总结 |
| 6.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）Lp-PLA2敲除兔模型的构建及其对动脉粥样硬化影响的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 动脉粥样硬化研究概述 |
| 1.1 动脉粥样硬化的发生 |
| 1.2 动脉粥样硬化的发展 |
| 1.3 炎症与动脉粥样硬化 |
| 1.4 血脂与动脉粥样硬化 |
| 第2章 Lp-PLA_2研究概述 |
| 2.1 Lp-PLA_2概述 |
| 2.2 Lp-PLA_2与动脉粥样硬化 |
| 2.3 Lp-PLA_2的基因多态性 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 Lp-PLA_2在兔动脉粥样硬化进程中的变化 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 Lp-PLA_2对血脂代谢的影响及作用机制研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 Lp-PLA_2对动脉粥样硬化的影响及作用机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（4）PLLA血管内支架降解产物乳酸调控再狭窄的生物学机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 主要缩略词 |
| 1 绪论 |
| 1.1 立题依据与意义 |
| 1.2 心血管疾病概述 |
| 1.2.1 心血管疾病的定义 |
| 1.2.2 心血管疾病的诱导因素 |
| 1.2.3 心血管疾病的治疗 |
| 1.3 完全生物可吸收支架研究进展 |
| 1.3.1 BRS的概念 |
| 1.3.2 BRS的种类及特点 |
| 1.3.3 BRS的临床应用效果 |
| 1.3.4 BRS面临的挑战及未来发展方向 |
| 1.4 聚乳酸降解产物乳酸研究进展 |
| 1.4.1 LA研究历史 |
| 1.4.2 LA是代谢中间产物 |
| 1.4.3 LA-肿瘤细胞 |
| 1.4.4 LA-神经细胞 |
| 1.4.5 LA-其他组织细胞 |
| 1.5 内皮-间充质转化研究进展 |
| 1.5.1 EndMT概述 |
| 1.5.2 EndMT与心血管系统 |
| 1.5.3 TGF-β1与EndMT |
| 1.6 乳酸受体GPR81 介绍 |
| 1.6.1 GPR81 的结构特征 |
| 1.6.2 GPR81 的组织分布 |
| 1.6.3 GPR81 的生物学功能 |
| 1.7 研究目的和主要内容 |
| 1.7.1 研究目的 |
| 1.7.2 研究内容 |
| 1.8 本文的创新点 |
| 1.9 研究示意图 |
| 2 PLLA血管内支架植入后再狭窄严重 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 试剂耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 新西兰大白兔术前准备 |
| 2.3.2 术前支架及手术器械准备 |
| 2.3.3 新西兰大白兔颈动脉支架植入实验 |
| 2.3.4 新西兰大白兔颈动脉支架植入血管取样 |
| 2.3.5 石蜡切片制样 |
| 2.3.6 石蜡切片苏木精和伊红(H&E)染色 |
| 2.3.7 石蜡切片Masson染色 |
| 2.3.8 石蜡切片免疫组化染色 |
| 2.3.9 PLLA降解实验 |
| 2.3.10 LA浓度检测 |
| 2.3.11 数据统计与分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 实验大白兔支架植入一般情况 |
| 2.4.2 支架植入血管段H&E染色评价狭窄变化情况 |
| 2.4.3 PLLA支架植入血管段Masson染色评价纤维化情况 |
| 2.4.4 PLLA支架植入血管段SM22α表达情况 |
| 2.4.5 LA是 PLLA降解过程主要降解产物 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 3 LA诱导血管纤维化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 试剂耗材 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验动物术前准备 |
| 3.3.2 手术器械准备 |
| 3.3.3 LA局部刺激大鼠腹主动脉实验 |
| 3.3.4 大鼠血管取样 |
| 3.3.5 大鼠血管组织或细胞RNA提取 |
| 3.3.6 大鼠血管组织或细胞RNA反转录 |
| 3.3.7 荧光定量PCR |
| 3.3.8 数据统计与分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 LA处理大鼠腹主动脉血管后Masson染色评价纤维化情况 |
| 3.4.2 LA处理大鼠腹主动脉血管后OPN表达情况 |
| 3.4.3 LA处理大鼠腹主动脉血管后纤维相关基因表达情况 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 LA诱导EndMT导致血管纤维化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 试剂耗材 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 大鼠血管enface染色 |
| 4.3.2 大鼠血管切片染色 |
| 4.3.3 细胞复苏 |
| 4.3.4 细胞换液 |
| 4.3.5 细胞传代 |
| 4.3.6 细胞冻存 |
| 4.3.7 MTS细胞增殖检测 |
| 4.3.8 细胞免疫荧光 |
| 4.3.9 p H调节 |
| 4.3.10 RNA-seq |
| 4.3.11 数据统计与分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 LA处理大鼠腹主动脉血管后内皮marker和间充质marker表达情况 |
| 4.4.2 LA影响HUVECs增殖情况分析 |
| 4.4.3 LA对 HUVECs细胞形态的影响 |
| 4.4.4 LA刺激HUVECs后内皮marker和间充质marker表达情况 |
| 4.4.5 RNA-Seq确证LA诱导EndMT |
| 4.4.6 LA诱导EndMT而不是p H变化 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 5 LA诱导EndMT的机制研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验仪器 |
| 5.2.3 试剂耗材 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 线粒体染色 |
| 5.3.2 ATP检测 |
| 5.3.3 ELISA检测 |
| 5.3.4 数据统计与分析 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 LA不影响内皮细胞内代谢 |
| 5.4.2 LA激活内皮细胞GPR81 表达 |
| 5.4.3 sh GPR81 显着降低GPR81 表达 |
| 5.4.4 沉默GPR81 阻滞LA诱导EndMT |
| 5.4.5 LA激活TGF-β1 信号相关蛋白表达 |
| 5.4.6 SB431542 显着抑制Smad表达 |
| 5.4.7 抑制TGF-β1 阻滞LA诱导EndMT |
| 5.4.8 sh GPR81 抑制TGF-β1 转录因子Sp-1 表达 |
| 5.4.9 MIT显着抑制TGF-β1和Sp-1 表达 |
| 5.4.10 抑制Sp-1 阻滞LA诱导EndMT |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 6 LA诱导EndMT的细胞力学变化 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料、仪器和试剂 |
| 6.2.1 实验材料 |
| 6.2.2 实验仪器 |
| 6.2.3 试剂耗材 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 细胞迁移(划痕实验) |
| 6.3.2 凝胶收缩实验 |
| 6.3.3 数据统计与分析 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 LA增强HUVECs迁移能力 |
| 6.4.2 LA增强HUVECs收缩能力 |
| 6.4.3 LA促进HUVECs骨架重排 |
| 6.4.4 骨架重排介导 LA诱导 EndMT |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 7 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 存在的不足及后续工作展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A 作者在攻读博士学位期间发表的论文及着作 |
| B 作者在攻读博士学位期间参与的科研项目 |
| C 学术论文数据集 |
| 致谢 |
（5）ADSC-CM对小型猪腹腔镜肝IRI合并部分肝切除保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 腹腔镜微创技术简介 |
| 1.1.1 腹腔镜微创技术的发展简介 |
| 1.1.2 腹腔镜肝切除术的发展应用 |
| 1.1.3 腹腔镜微创技术的客观评价 |
| 1.1.4 腹腔镜微创技术的发展方向 |
| 1.2 肝脏缺血再灌注损伤 |
| 1.2.1 肝脏缺血再灌注损伤的发生机制 |
| 1.2.2 肝脏缺血再灌注损伤的预防治疗 |
| 1.2.3 探究肝脏缺血再灌注损伤的实验动物模型 |
| 1.3 间充质干细胞概述 |
| 1.3.1 干细胞的生物学特性与分类 |
| 1.3.2 间充质干细胞的由来与定义 |
| 1.3.3 间充质干细胞生物学功能 |
| 1.3.4 间充质干细胞作用机制 |
| 1.3.5 干细胞临床应用的安全性 |
| 1.4 间充质干细胞条件培养基 |
| 1.4.1 间充质干细胞的旁分泌作用 |
| 1.4.2 间充质干细胞条件培养基的治疗作用 |
| 1.4.3 脂肪间充质干细胞条件培养基 |
| 1.4.4 脂肪间充质干细胞条件培养基的临床应用 |
| 1.5 目的与意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验器材 |
| 2.1.3 试验药品及试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 小型猪脂肪间充质干细胞的分离培养 |
| 2.2.2 改良后小型猪脂肪间充质干细胞的鉴定 |
| 2.2.3 改良后小型猪脂肪间充质干细胞的评估 |
| 2.2.4 小型猪脂肪间充质干细胞条件培养液的提取制备 |
| 2.2.5 小型猪腹腔镜下肝缺血再灌注合并部分切除模型的建立 |
| 2.2.6 腹腔镜建立肝缺血再灌注合并部分切除模型的安全性监测 |
| 2.2.7 小型猪ADSC-CM对血液常规指标的影响 |
| 2.2.8 小型猪ADSC-CM对肝组织形态学观察 |
| 2.2.9 小型猪ADSC-CM对肝脏酶谱的影响 |
| 2.2.10 小型猪ADSC-CM对肝脏氧化应激的影响 |
| 2.2.11 小型猪ADSC-CM对炎症反应的影响 |
| 2.2.12 小型猪ADSC-CM对肝细胞凋亡的影响 |
| 2.2.13 小型猪ADSC-CM对肝再生的影响 |
| 2.2.14 小型猪ADSC-CM成分检测 |
| 2.2.15 数据统计分析方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 小型猪脂肪间充质干细胞的分离培养和形态比较 |
| 3.2 小型猪脂肪间充质干细胞的鉴定 |
| 3.2.1 表面抗原的鉴定 |
| 3.2.2 成骨分化能力的鉴定 |
| 3.2.3 成脂分化能力的鉴定 |
| 3.2.4 成肝分化能力的鉴定 |
| 3.3 改良后小型猪脂肪间充质干细胞的评估 |
| 3.3.1 增殖能力的比较 |
| 3.3.2 迁移能力的比较 |
| 3.4 小型猪脂肪间充质干细胞条件培养液的提取制备 |
| 3.4.1 小型猪脂肪间充质干细胞条件培养液的提取 |
| 3.4.2 小型猪脂肪间充质干细胞条件培养液的浓缩 |
| 3.5 腹腔镜建立肝损伤模型安全性监测结果 |
| 3.6 血液常规指标检测结果 |
| 3.6.1 白细胞(WBC) |
| 3.6.2 中性粒细胞(NE) |
| 3.6.3 淋巴细胞(LY) |
| 3.7 肝组织形态学观察结果 |
| 3.7.1 肝脏病理结构观察结果 |
| 3.7.2 肝脏超微结构观察结果 |
| 3.8 术后肝脏酶谱检测结果 |
| 3.8.1 谷丙转氨酶(ALT) |
| 3.8.2 谷草转氨酶(AST) |
| 3.8.3 碱性磷酸酶(ALP) |
| 3.8.4 乳酸脱氢酶(LDH) |
| 3.8.5 总胆红素(TBIL) |
| 3.8.6 总蛋白(TP) |
| 3.9 肝组织氧化应激检测结果 |
| 3.9.1 丙二醛(MDA) |
| 3.9.2 超氧化物歧化酶(SOD) |
| 3.9.3 过氧化氢酶(CAT) |
| 3.9.4 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px) |
| 3.9.5 髓内过氧化物酶(MPO) |
| 3.10 炎症反应水平检测结果 |
| 3.10.1 血清炎症相关指标检测结果 |
| 3.10.2 肝脏组织炎症相关基因水平检测结果 |
| 3.11 肝细胞凋亡水平检测结果 |
| 3.11.1 肝脏组织凋亡相关酶活性检测结果 |
| 3.11.2 肝脏组织凋亡相关基因水平检测结果 |
| 3.11.3 肝脏组织凋亡相关蛋白水平检测结果 |
| 3.11.4 肝脏组织Fas和Fasl免疫组织化学染色结果 |
| 3.11.5 肝脏组织TUNEL染色结果 |
| 3.12 肝脏再生水平检测结果 |
| 3.12.1 血清再生相关指标检测结果 |
| 3.12.2 组织再生相关基因检测结果 |
| 3.12.3 组织再生相关蛋白检测结果 |
| 3.12.4 肝脏组织Ki67免疫组织化学染色结果 |
| 3.13 小型猪ADSC-CM成分分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 ADSCs培养方法的改良 |
| 4.2 ADSC-CM对肝脏缺血再灌注损伤的研究基础 |
| 4.3 ADSC-CM对小型猪肝脏功能的影响 |
| 4.4 ADSC-CM对小型猪氧化应激的影响 |
| 4.5 ADSC-CM对小型猪炎症反应的影响 |
| 4.6 ADSC-CM对小型猪细胞凋亡的影响 |
| 4.7 ADSC-CM对小型猪肝脏再生的影响 |
| 4.8 小型猪ADSC-CM成分分析的探讨 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
（6）铅污染对水蛭及其抗凝血作用影响的代谢组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 水蛭的养殖现状 |
| 2 水蛭药材重金属污染的研究进展 |
| 3 水蛭抗凝血活性的研究进展 |
| 4 血瘀证的研究进展 |
| 5 代谢组学的研究现状 |
| 6 总结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二章 立题依据与研究内容 |
| 1 立题依据 |
| 2 研究内容 |
| 3 技术路线图 |
| 第三章 铅污染水蛙的养殖 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 铅污染水蛭的养殖 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 第四章 铅污染水蛭对凝血功能和血液流变影响的研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 不同处理组水蛭体外凝血功能实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 不同处理组水蛭对血瘀证大鼠凝血功能与血液流变学的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第四节 铅对大鼠凝血功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第五节 小结与讨论 |
| 第五章 水蛭组织代谢组学研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 水蛭组织代谢组学研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 第六章 铅污染水蛭干预急性血瘀模型大鼠血浆的代谢组学研究 |
| 第一节 概述 |
| 第二节 各组大鼠血浆的代谢组学研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 第七章 总结与展望 |
| 1 研究结果 |
| 2 全文总结 |
| 3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 个人简历 |
（7）医用胶对兔积液子宫的栓堵效果及组织学研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1. 输卵管积液对IVF-ET的影响及处理方法 |
| 1.1 输卵管性不孕及处理方法 |
| 1.2 输卵管积液对IVF-ET妊娠结局的影响及处理方法综述 |
| 2. 本研究设计思路及目的 |
| 2.1 输卵管绝育的栓堵研究 |
| 2.2 IVF-ET前病变输卵管的栓堵研究 |
| 3. 输卵管栓堵材料 |
| 3.1 输卵管绝育栓堵材料 |
| 3.2 IVF-ET前输卵管栓堵术所用材料 |
| 3.3 本研究所选栓堵材料 |
| 4. 本研究实验动物及实验部位的选择 |
| 第二章 兔子宫积液模型的建立 |
| 1. 前言 |
| 2. 建模方法选择 |
| 3. 实验材料 |
| 3.1 实验试剂、仪器及厂家 |
| 3.2 实验动物 |
| 4. 实验方法 |
| 4.1 兔阴道脱落细胞学观察 |
| 4.2 菌液配制 |
| 4.3 动物分组 |
| 4.4 手术方法 |
| 4.5 大体和组织学观察 |
| 4.6 肌层厚度比较 |
| 4.7 统计学方法 |
| 5. 实验结果 |
| 5.1 阴道脱落细胞学观察 |
| 5.2 大体观察 |
| 5.3 组织形态学 |
| 5.4 肌层厚度比较 |
| 6. 讨论 |
| 7. 结论 |
| 第三章 医用胶对兔积液子宫的栓堵效果及组织学研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与流程 |
| 2.1 实验仪器及厂家 |
| 2.2 实验材料、试剂及厂家 |
| 2.3 实验医用胶 |
| 2.4 实验动物 |
| 2.5 实验流程图 |
| 3. 实验方法 |
| 3.1 动物分组 |
| 3.2 体重记录 |
| 3.3 阴道脱落细胞学观察 |
| 3.4 手术方法 |
| 3.5 子宫输卵管造影 |
| 3.6 子宫、输卵管及卵巢大体和组织学观察 |
| 3.7 子宫、输卵管及卵巢组织雌孕激素受体测定与凋亡检测 |
| 3.8 透射电镜观察 |
| 3.9 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 阴道脱落细胞学观察 |
| 4.2 实验兔存活情况 |
| 4.3 医用胶栓堵子宫情况 |
| 4.4 实验组和对照组兔体重变化情况 |
| 4.5 子宫输卵管造影结果 |
| 4.6 大体观察和组织形态学 |
| 4.7 雌孕激素受体测定及凋亡检测 |
| 4.8 透射电镜观察 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 医用胶的发展、应用及改良 |
| 5.2 选择新西兰兔的原因及临床应用可行性分析 |
| 5.3 选择兔动情初期-动情中期取材的原因分析 |
| 5.4 本研究结果讨论 |
| 5.5 子宫及输卵管炎性病变通过ER、PR变化对子宫内膜容受性影响的讨论 |
| 5.6 本研究创新点 |
| 5.7 本研究的局限性及临床应用展望 |
| 6. 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表的论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文1 |
| 英文论文2 |
（8）胶原与类胶原基质用于构建成骨材料的初步研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| (一)胶原与自组装类胶原多肽的研究进展 |
| (二)间充质干细胞与立体培养 |
| 第一部分 :胶原改善自固化磷酸钙材料生物活性的可行方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 :采用自组装多肽复合hUCMSCs构建类骨胶原基质的研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）乳牙牙髓干细胞聚合体来源外泌体在牙髓再生中的作用研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 实验一 SHED的分离培养与鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 Exosomes提取鉴定及miRNA数据采集信息分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 Exosomes对SHED生物学功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 裸鼠异位移植体内实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验五 小型猪原位移植临床前实验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（10）扩张器包膜培育带蒂血管化工程组织瓣的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一部分 扩张器包膜作为血管床培育带蒂口腔黏膜瓣重建前尿道缺损 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于扩张器包膜预构带蒂口腔黏膜瓣经耻骨途径后尿道成形 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 扩张器包膜作为血管床培育带蒂膀胱逼尿肌瓣重建膀胱肌层缺损 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 致谢 |
| 附录 |
四、华牧安全健康蛋课题通过鉴定（论文参考文献）
- [1]小型猪四肢荧光素钠循经迁移及运动对迁移影响的观察[D]. 熊枫. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]基于红外图像奶牛发情信息监测装置的研究[D]. 刘国强. 内蒙古农业大学, 2021(02)
- [3]Lp-PLA2敲除兔模型的构建及其对动脉粥样硬化影响的研究[D]. 陈佳欢. 吉林大学, 2021(01)
- [4]PLLA血管内支架降解产物乳酸调控再狭窄的生物学机制研究[D]. 侯郑军. 重庆大学, 2020(02)
- [5]ADSC-CM对小型猪腹腔镜肝IRI合并部分肝切除保护作用的研究[D]. 焦智慧. 东北农业大学, 2020(04)
- [6]铅污染对水蛭及其抗凝血作用影响的代谢组学研究[D]. 罗雪梅. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]医用胶对兔积液子宫的栓堵效果及组织学研究[D]. 徐安然. 山东大学, 2019(02)
- [8]胶原与类胶原基质用于构建成骨材料的初步研究[D]. 李元. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [9]乳牙牙髓干细胞聚合体来源外泌体在牙髓再生中的作用研究[D]. 张青. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [10]扩张器包膜培育带蒂血管化工程组织瓣的研究[D]. 郭海林. 上海交通大学, 2019(06)