一、Expression of Tenascin and Fibronectin in Nasal Polyps（论文文献综述）
潘仰望,臧洪瑞[1]（2021）在《外泌体调控鼻息肉发病机制的研究进展》文中研究指明鼻息肉作为耳鼻咽喉科的常见疾病,人群发病率约为1%～4%。鼻息肉的组织学特征表现为血管内皮间隙增大,导致大量血浆蛋白漏出,组织呈现高度水肿的状态。外泌体作为一种纳米级囊泡,能运载多种蛋白质、mRNA、miRNA等物质,通过影响鼻腔菌群多样性,调节血管生成及通透性,分泌多种特定蛋白质等方式调控鼻息肉的发生发展。本文综述外泌体调控鼻息肉的发病机制,旨在为鼻息肉的临床诊治提供新思路。
乐露露[2]（2021）在《子宫内膜癌关键基因的筛选及分子机制研究》文中研究说明背景与目的:子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma,EC）是来源于子宫内膜上皮的一组恶性肿瘤。EC的发病率和死亡率正在逐年上升,严重威胁妇女的健康。目前治疗的方案主要是以手术为主,其次是以放疗、化疗、激素治疗等辅助手段进行综合治疗。最近几年,早期诊断,手术,放疗和化疗可以显着改善治疗效果,但对治疗早期病灶并需要保留生育能力,晚期和复发的患者仍然有限。因此,探寻子宫内膜癌发生、发展及耐药的潜在分子机制,寻找新颖的生物标志物和有效的治疗靶点迫在眉睫。当今临床面临的最大挑战之一是开发可临床应用且功能强大的生物标记物,以预测预后并选择更可能受益患者的治疗。为了改善子宫内膜癌的治疗预后,需要发展可独立预测的更强大的生物标志物。子宫内膜癌的演化是一个多基因参与,多步骤发展的过程,主要与原癌基因的激活与抑癌基因的丢失或突变有关。目前多种原癌基因和（或）抑癌基因的发现能部分阐明肿瘤的发生机制。如果这些基因能够合理的解释肿瘤的某些生物学行为,为进一步临床治疗提供依据,那么这些基因有可能成为未来肿瘤治疗的靶点,而深入研究这些基因的作用机制及功能则是重要前提。由于芯片和高通量测序技术的广泛应用,积累了越来越多的有关肿瘤研究领域的基因组学数据,这些数据库为肿瘤学的研究提供了一定的便利。由于子宫内膜癌发病机理复杂,参与EC的发生和发展的关键基因尚不完全清楚。因此,本研究的目是运用生物信息学筛选全基因组差异表达基因和子宫内膜癌信号通路中的关键基因,探讨EC发病机制和预后的潜在生物标志物,为EC的早期筛查和靶向治疗提供理论依据。实验方法:1.数据处理:我们基于癌症基因组图谱（TCGA）和基因表达综合（GEO）数据库中子宫内膜癌的数据进行生物信息学综合分析,我们对3个独立的数据集的可用转录组数据进行了综合分析,鉴定出差异表达基因（differentially expressed Genes,DEGs）。信号通路筛选和评估成髓细胞瘤转录因子第2亚型（MYB proto-oncogene like 2,MYBL2）基因表达水平与临床病理特征和生存的关系。2.临床验证:通过免疫组织化学染色方法验证子宫内癌组织中MYBL2基因的表达情况,与临床病理特征的关系。3.细胞增殖实验:建立了两个代表性的EC细胞模型,观察sh-MYBL2抑制MYBL2表达时EC细胞的增殖能力。RNA-seq实验技术分析MYBL2沉默对子宫内膜癌细胞模型转录组的影响。结果:1.TCGA联合GEO数据库（3个数据集）共筛选出5个DEGs,即ASPA、MYBL2、TROAP、CCNB2和CDC25C（P均<0.05）;5个DEGs中,MYBL2高低表达EC患者总生存期（Overall Survival,OS）和无病生存期（Disease-free Survival,DFS）差异有统计学意义（P<0.05）,且组织低分化、Ⅱ型EC患者MYBL2基因高表达比例分别高于高分化、Ⅰ型患者（P均<0.05）。2.本研究通过子宫内膜癌信号通路的筛选,发现MYBL2在B-MYB/FOMX1信号通路起重要作用。子宫内膜癌经典信号通路中关键基因EGF、IGF、TGF在子宫内膜癌中低表达,且与子宫内膜癌的生存无关,最终筛选出关键基因MYBL2。3.MYBL2在子宫内膜癌中存在明显的拷贝数变异（copy-number variation,CNV）（p<0.001）,主要的变异形式为基因扩增,且拷贝数的扩增明显上调了MYBL2 m RNA表达水平（p<0.001）,携带MYBL2基因CNV的子宫内膜癌患者OS与DFS均明显低于不携带该基因CNV的患者（P<0.05）。II型子宫内膜癌中MYBL2的CNV变异更显着（P﹤0.05）。4.MYBL2的高表达与子宫内膜癌的病理类型、病理分期和不良预后有关（P<0.05）,与患者患病年龄、月经情况和FIGO分期无显着性关联（P>0.05）。5.临床验证结果发现子宫内膜癌组织中MYBL2蛋白的表达量明显高于对应癌旁正常子宫内膜组织,且在癌组织中表达的阳性率高于癌旁组织（P<0.05）。MYBL2在子宫内膜癌组织中过表达,与不同病理类型、组织分级和有无淋巴结转移有关（P<0.05）。6.MYBL2基因表达的下调可以显着抑制子宫内膜癌细胞系HEC-1-B和AN3CA体外细胞增殖,并使子宫内膜癌细胞阻滞在G1期,诱导子宫内膜癌细胞凋亡。7.RNA-seq技术和通路富集分析,发现MYBL2与细胞周期和细胞凋亡这两个通路密切相关,可以激活与细胞增殖有关的基因表达。结论:1.子宫内膜癌全基因组差异性表达分析,发现MYBL2在子宫内膜癌中高表达,且与不良预后相关,因此MYBL2基因是子宫内膜癌发生发展的关键基因。2.本研究首次发现,MYBL2基因在子宫内膜癌组织中存在明显拷贝数的扩增,拷贝数的扩增影响其表达和生存,说明MYBL2的DNA变异促进了子宫内膜癌的发生和发展。3.子宫内膜癌组织中MYBL2呈高表达,且与不良临床病理特征相关,提示MYBL2可能在肿瘤发生、发展和转移过程中起着重要的作用。4.MYBL2可能通过调控细胞周期,促进细胞增殖,抵抗凋亡,在子宫内膜癌细胞的增殖中起关键作用,说明MYBL2在子宫内膜癌进展中发挥其致癌作用。5.MYBL2可能作为一种新的EC患者预后和治疗指标的生物标志物。
谢艳华[3]（2020）在《MiR-146a通过TRAF6抑制CRSwNP中HNE诱导的MUC5AC表达的研究机制》文中进行了进一步梳理目的:探讨微小RNA-146a（Micro ribo Nucleic acid-146a,MiR-146a）是否通过肿瘤坏死因子受体相关因子6（Tumor necrosis factor receptor-related factor,TRAF6）作用引起慢性鼻窦炎伴鼻息肉（Chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）中人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶（Human neutrophil elastase,HNE）诱导的粘蛋白5AC（Mucin 5AC,MUC5AC）表达降低及其作用机制。方法:1免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）、实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR Detecting System,qRT-PCR）、酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测CRSwNP组和正常对照组的鼻腔、鼻窦黏膜中的MUC5AC、MiR-146a和TRAF6的表达;2、体外进行鼻黏膜原代上皮细胞（Human nasal epithelial cells,HNECs）的培养,用HNE刺激后,WB、ELISA、qRT-PCR检测MUC5AC、MiR-146a、TRAF6的表达;分别用MiR-146a NC、MiR-146a mimic和MiR-146a inhibitor转染经HNE刺激的鼻黏膜上皮细胞后,WB、ELISA、qRT-PCR检测MUC5AC、MiR-146a、TRAF6的表达;3、TRAF6抑制肽作用于MiR-146a inhibitor转染组后,WB、ELISA、qRTPCR检测MUC5AC、MiR-146a和TRAF6的表达;4、双荧光素酶报告基因鉴定TRAF6与MiR-146a的关系。结果:1、与对照相比,通过IHC、qRT-PCR、ELISA发现CRSwNP中TRAF6、MUC5AC表达上调（P<0.05）;MiR-146a表达下调。2、HNE组中,MiR-146a、MUC5AC、TRAF6表达较对照组上调;MiR-146a mimic组中,MiR-146a表达较NC组显着上调,MUC5AC、TRAF6表达较NC组下调。3、MiR-146a inhibitor组中,MiR-146a表达较NC组显着下调,MUC5AC、TRAF6表达较NC组上调;TRAF6抑制肽作用于MiR-146a inhibitor转染组后,MUC5AC、TRAF6表达较NC组下调（p<0.05）。4、mi RNA mimic组测定的RLUC值较内参组明显降低;而MiR-146a inhibitor组结果与mimic组呈相反趋势,说明TRAF6即为MiR-146a的靶基因。结论:在CRSwNP中MiR-146a通过靶向调控TRAF6的表达,从而抑制HNE诱导的HNECs中MUC5AC的表达。
牟书敏[4]（2020）在《T2DM血清Periostin与尿微量白蛋白相关性研究》文中研究说明目的研究2型糖尿病患者血清Periostin（POSTN）水平与尿微量白蛋白水平之间的关系并探讨其影响因素。方法收集了从2018年12月至2019年11月于河北省人民医院住院的2型糖尿病（Type 2 Diabetes mellitus,T2DM）患者176例,其中男性患者104例,女性患者72例,平均年龄59.23岁。测定这些患者的糖化血红蛋白、尿素氮、肌酐、肾小球滤过率、甘油三酯、胆固醇、血浆白蛋白、尿微量白蛋白等化验指标,并根据尿微量白蛋白水平将其分为对照组（<30mg/d）、微量蛋白尿组（>30mg/d）两组。应用ELISA方法检测两组的血清POSTN浓度水平。结果1.微量蛋白尿组与对照组相比,TC水平呈上升趋势[4.75±1.214VS4.49±1.13mmol/L],P=0.134>0.05,差异无统计学意义;TG水平呈上升趋势[1.65（1.26,2.53）VS 1.24（0.87,1.75）mmol/L],P<0.001,差异具有统计学意义。2.微量蛋白尿组血清POSTN水平高于对照组[（2.02±0.84）VS（0.38±0.26）ng/m L],P<0.001,差异具有统计学意义。3.1)总受试者人群中血清POSTN与尿微量白蛋白、尿素氮、肌酐、甘油三酯、糖尿病病程、收缩压、舒张压呈正相关,与血浆白蛋白、肾小球滤过率呈负相关。（P值均﹤0.05）2)对照组血清POSTN与尿微量白蛋白、尿素氮、肌酐呈正相关,与肾小球滤过率呈负相关。（P值均﹤0.05）3)微量蛋白尿组血清POSTN与尿微量白蛋白、收缩压、舒张压、高血压病程呈正相关（P值均﹤0.05）。4.血清POSTN影响因素分析结果:BMI、尿微量白蛋白、糖尿病病程为正性影响因素,P值均<0.05。结论1在T2DM患者中,微量蛋白尿组患者的血清POSTN水平升高。2在T2DM患者中,尿微量白蛋白、肌酐、甘油三酯及糖尿病病程为血清POSTN水平异常升高的危险因素。同时BMI、尿微量白蛋白及糖尿病病程为其正性影响因素。表[4]个;参[124]篇。
谢娇娇[5]（2020）在《抗阻、有氧运动对ITGB1信号通路介导的骨骼肌肥大的影响》文中指出背景:肌肉衰减综合症是一种因为衰老而导致的肌肉质量和力量下降,继而引起肌肉功能下降的老年性疾病,60岁以上人群轻症发病率高达50%,严重降低了人们的生活质量。衰老导致肌卫星细胞（satellite cells,SC）激活困难,蛋白质合成障碍,运动却有利于肌肉重塑,增加肌肉蛋白质合成,提高肌肉质量,具体机制尚未研究清晰。有研究表明,β1整合素（β1 integrin,ITGB1）与下游黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）是与肌肉肥大相关的分子,ITGB1也调节了细胞外基质的组成和代谢。运动是否通过ITGB1调节胶原沉积,促进肌肉蛋白质合成,仍有待进一步研究。目的:拟从ITGB1信号通路入手,研究抗阻、有氧运动对中年期小鼠肌肉力量的影响,探讨ITGB1-FAK-m TORC1信号通路促进肌肉肥大的分子机制,以及通过胶原沉积影响SC激活的机理,旨在为运动干预对肌肉衰减的影响提供新的视角,也为运动预防骨骼肌肌肉衰减提供更为完善的运动干预手段。方法:C57BL/6J健康小鼠18只,标准条件饲养至12.5月龄,随机分成3组,分别是安静对照组;抗阻训练组,接受8周、每周三次负重爬梯训练;有氧训练组,进行8周、每周三次跑台训练。每周日测量每只小鼠体重、抓握力,并测试每只抗阻训练组小鼠的最大负荷。实验后脱颈处死小鼠,迅速剥下两侧腓肠肌待用。采用Western Blotting技术检测腓肠肌ITGB1、Pax7、Myf5的蛋白表达和m TORC1、FAK、SRC的蛋白表达及其磷酸化水平;采用免疫荧光技术对腓肠肌胶原蛋白和laminin进行共定位。利用SPSS软件,采用单因素方差分析和配对样本t检验进行统计。结果:（1）体重、抓握力和肌肉湿重的变化:实验后,对照组小鼠体重显着性上升（p<0.05）。与对照组相比,抗阻训练组小鼠体重显着性降低（p<0.05）,腓肠肌湿重/体重比值、抓握力和相对抓握力显着性提高（p<0.05）。训练结束后,与有氧训练组相比,抗阻训练组小鼠抓握力也显着升高（p<0.05）。（2）与骨骼肌SC激活有关指标的变化:与对照组相比,抗阻训练组小鼠腓肠肌Pax7的蛋白表达极为显着性上调（p<0.01）,腓肠肌胶原容积分数显着性下降（p<0.05）。三组小鼠Myf5的蛋白表达无显着性差异,单根肌纤维中肌核数量也无显着性差异。（3）肌纤维数量和面积的变化:在相同的视野范围内,与对照组相比,抗阻训练组小鼠肌纤维的数量显着下降（p<0.05）,单个肌细胞的平均面积显着增加（p<0.05）。（4）ITGB1与细胞内信号通路相关蛋白的变化:与对照组相比,抗阻训练组小鼠腓肠肌ITGB1的蛋白表达显着性升高（p<0.05）,m TORC1和FAK、SRC的磷酸化水平显着性升高（p<0.05）。结论:（1）中年小鼠体重上升,但运动能保持体重的稳定。（2）8周抗阻运动可有效增加小鼠腓肠肌湿重/体重的比值,提高抓握力,预防骨骼肌衰减;有氧运动对提升小鼠抓握力效果不明显。（3）8周抗阻运动可通过ITGB1改善胶原沉积,提高小鼠SC的激活水平。（4）8周抗阻运动通过ITGB1提高FAK和SRC的磷酸化水平,促进m TORC1信号通路激活,这可能是抗阻运动促进肌肉肥大的主要原因。
闫威[6]（2020）在《低氧下G2A对巨噬细胞极化调控的研究》文中提出目的:探索体外实验中G2A在低氧环境下调控巨噬细胞产生极化的信号通路以及参与炎症反应的分子机制。方法:采用细胞培养方法进行研究,将大鼠骨髓来源巨噬细胞分为4组:（1）常氧组（NC）:细胞培养箱中常氧（21%O2）培养24小时;（2）低氧组（H）:低氧培养箱（37℃、1%O2、5%CO2）中培养24小时;（3）低氧LPC刺激组（H+LPC）:向培养基中加入LPC（0.2μmol/l）刺激剂,于低氧培养箱（37℃、1%O2、5%CO2）中培养24小时;（4）低氧下LPC刺激加G2A干扰组（H+LPC+G2A-）:利用慢病毒干扰技术,向巨噬细胞转染G2Asi RNA慢病毒,同时向培养基中加入LPC刺激剂,于低氧培养箱（37℃、1%O2、5%CO2）中培养24小时。上述各组相应处理结束后收集细胞上清液进行炎症因子检测并提取细胞RNA及蛋白进行相关检测。实时荧光定量PCR技术检测M1型巨噬细胞相关表面标记物i NOS、CD86m RNA的表达以及信号通路中G2A、STAT5、IRF5m RNA表达量变化。Western-blot检测细胞中G2A、STAT5、IRF5蛋白表达量变化。ELISA检测细胞上清液中MI巨噬细胞有关的炎症因子IL-1β、IL-6、IL-23、TNFα表达量。结果:（1）各组巨噬细胞m RNA测定结果:i NOS、CD86、G2A、STAT5/IRF5信号通的m RNA在H组较NC组均高表达,差异有统计学意义（t分别=5.67、7.93、8.24、15.9、12.7,均P<0.05）;H+LPC组中表达均较H组显着升高,差异有统计学意义（t分别=5.40、4.51、4.66、3.77、4.49,均P<0.05）;而H+LPC+G2A-组较H+LPC组显着降低（t分别=10.3、8.83、6.76、5.81、6.80,均P<0.05）,但高于NC组（t分别=5.67、7.93、3.63、8.55、12.7,均P<0.05）;表明在低氧情况下G2A高表达,而且经LPC刺激巨噬细胞后M1型相关的表面标志物（i NOS、CD86）表达升高,说明低氧下LPC促进巨噬细胞向M1型转化,但仅抑制G2A并不能完全恢复。（2）各组巨噬细胞蛋白测定结果:G2A、STAT5、IRF5蛋白的表达在H组较NC组中高表达,（t分别=9.40、3.34、20.6,均P<0.05）;H+LPC组中表达均较H组显着升高,（t分别=2.41、3.24、2.78,均P<0.05）;而H+LPC+G2A-组较H+LPC组显着降低,（t分别=7.05、23.7、19.0,均P<0.05）,但高于NC组（t分别=6.35、37.0、9.37,均P<0.05）;结合上述STAT5/IRF5m RNA的结果,说明低氧下LPC可能通过激活G2A/STAT5/IRF5信号通路调控巨噬细胞极化。（3）各组巨噬细胞培养液中细胞因子测定结果:IL-1β、IL-6、IL-23、TNFα炎症因子表达在H组较NC组中高表达（t分别=17.5、12.5、9.86、14.7,均P<0.05）;在H+LPC组中表达均较H组显着升高（t分别=12.9、7.60、10.8、11.1,均P<0.05）;而H+LPC+G2A-组较H+LPC组显着降低（t分别=25.5、13.1、20.5、16.5,均P<0.05）,但高于NC组（t分别=7.72、6.82、3.75、5.80,均P<0.05）。结论:（1）低氧下LPC可以促进巨噬细胞产生IL-1β、IL-6、IL-23、TNFα炎症因子表达,且较单纯低氧组明显升高。而且经基因及蛋白检测,M1巨噬细胞表面标志物（i NOS、CD86）明显升高,提示LPC可以使巨噬细胞向促炎表型（M1）转化。（2）慢病毒干扰巨噬细胞G2A表达,可明显减少M1型巨噬细胞表面标记物表达,减弱了巨噬细胞向M1型极化,且不受LPC刺激影响而下调炎症因子表达量。（3）干扰G2A后STAT5、IRF5表达量均明显减弱,提示低氧环境中G2A可能通过G2A/STAT5/IRF5这条信号通路调控巨噬细胞向M1型极化。
吴汉平[7]（2020）在《Wnt/β-catenin信号通路与哮喘气道重塑的研究进展》文中研究指明支气管哮喘（简称哮喘）是一种慢性气道炎症性疾病,其典型的病理特征包括气道重塑。气道重塑可导致气道高反应性、不可逆的气流受限以及肺功能的减退。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在肺损伤后的修复中发挥重要作用,同时,Wnt/β-catenin信号通路的异常激活可导致哮喘气道重塑。该文对Wnt/β-catenin信号通路与哮喘气道重塑的研究进展进行综述,并探讨其在哮喘中可能的治疗靶点,有利于进一步研究哮喘的临床治疗。
刘海宁,杨国棠,陈长康,杨贵[8]（2020）在《黏膜固有免疫屏障在真菌性鼻窦炎发病中的研究进展》文中研究说明真菌性鼻窦炎（FRS）是一种特异性鼻窦感染性疾病,近年来发病率逐年升高。黏膜固有免疫屏障（黏膜上皮屏障、固有免疫细胞、固有免疫分子）缺陷和真菌在鼻黏膜的定植均与FRS发病密切相关,因此,多种影响固有免疫的因素与适应性免疫之间的联系受到广泛关注。近年来,各型FRS发病机制的研究推动了FRS相关实验室诊断方法的发展,但目前FRS的具体发病机制尚不明确,且存在预防困难、漏诊误诊率较高、治疗不彻底等问题,患者的精神和经济负担均较重。
董秀芳[9]（2019）在《低温辅助内源酶主导的海参嫩化分子机理研究》文中研究说明海参作为我国单品产值较高的水产品,2018年全国年产量超过17.4万吨,产值超过400亿元。海参的加工制品种类多样,其中即食、鲜食海参因可以避免干制、水发等工艺而减少了大量的营养成分流失,且食用方便、口感较好。在评价即食海参品质的众多指标中,嫩度较为重要。海参体壁中70%以上的蛋白为胶原蛋白,且在自然状态下胶原蛋白交联聚集成具有较强机械性能的胶原纤维网络结构,因此其加工制品的嫩度较难把控。低温嫩化技术可提高海参体壁的嫩度,主要依赖内源酶对结构蛋白的降解作用。但在海参体壁低温嫩化过程中,有哪些内源酶参与,这些内源酶又是被如何激活,涉及哪些生物分子信号机制,这些问题尚不清楚。为此,本文围绕解释上述问题展开研究,揭示内源酶参与调控海参嫩化的机理,以及嫩化过程中内源酶激活的分子生物学机制,为海参嫩化加工过程的品质控制提供理论依据。（1）采用质地剖面分析、流变分析、差式扫描量热（DSC）、光镜-组织化学、扫描电镜（SEM）和电子顺磁共振波谱（EPR）技术,对海参体壁低温嫩化过程中的理化特性进行表征。通过测定羰基、巯基和氨基的含量、蛋白分布模式、胶原蛋白溶出情况表征蛋白一级结构的变化,通过测定圆二色性和表面疏水性表征蛋白二级和三级结构的变化。结果表明,随着嫩化时间的延长,海参体壁的硬度、咀嚼性和弹性均显着降低。胶原蛋白的热稳定性降低,微观结构上出现胶原原纤维解聚的现象。水溶性蛋白中,氨基酸侧链修饰、二级三级构象趋向不稳定转变,自由基大量生成,表明蛋白氧化的发生。游离氨基释放、结构蛋白降解,表明蛋白降解的发生。揭示海参体壁嫩化的实质为胶原纤维结构的破坏,伴随蛋白氧化和蛋白降解作用,为后续开展嫩化机理研究奠定基础。（2）采用分光光度法测定海参体壁嫩化过程中内源酶活力的变化,然后正向添加胶原酶和反向添加蛋白酶抑制剂分别处理海参体壁,通过测定TCA可溶性寡肽、羟脯氨酸含量和蛋白分布模式的变化来说明蛋白的降解情况。结果表明,海参体壁嫩化过程中,cathepsin L、caspase-3和MMPs的活力显着提高。胶原酶可对海参体壁进行降解,且与嫩化后海参体壁蛋白的降解模式一致。半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶的抑制剂均可不同程度地抑制小分子蛋白的降解,且后两者针对大分子蛋白的降解也有明显抑制作用。从3种不同角度证实了嫩化过程中以半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶为主的内源酶参与了蛋白的降解。（3）以海参胶原纤维为模型,对其分别进行氧化、热处理以及二者共同作用。采用分光光度法、电泳、高效液相色谱等技术研究蛋白和糖胺聚糖的溶出和降解情况。采用EPR、傅里叶变换红外、DSC和SEM表征胶原纤维结构的变化。采用茶多酚（EGCG）对热处理模型进行抗氧化处理,通过上述测试判断热处理过程中是否伴随氧化作用的参与。结果表明,氧化和热处理均可导致蛋白、糖胺聚糖溶出,氧化更容易促进小分子蛋白溶出和蛋白聚糖降解。氧化和热处理均可导致胶原蛋白氧化,促使胶原原纤维的解离,α-螺旋向β-折叠转换,热变性温度降低,肽键断裂的特征分解温度降低。当EGCG添加量为125μg/mL时,可显着抑制热处理造成的蛋白聚糖和胶原蛋白的结构变化,提高胶原纤维的稳定性。揭示了氧化在海参体壁嫩化过程中的重要作用,即热处理可造成大量自由基产生,引发蛋白氧化,直接导致胶原纤维结构的被破坏,宏观表现为嫩度的提高。（4）采用iTRAQ蛋白组学技术研究海参体壁低温嫩化过程中差异蛋白的表达,然后结合生物信息学分析手段对差异表达蛋白进行生物功能和信号通路注释。结果表明,cathespins、calpains、caspases、proteasomes和MMPs的蛋白表达量均显着上调。生物信息分析证明了嫩化过程中主要涉及氧化应激、固有免疫反应、细胞凋亡、细胞骨架蛋白和细胞外基质蛋白重组等生物学进程,且彼此间存在交互作用。从蛋白表达水平上揭示了内源酶介导嫩化的分子机制。（5）采用转录组测序（RNA-seq）技术来研究海参体壁低温嫩化过程中差异基因的表达,然后结合生物信息学分析手段对差异表达基因进行生物功能和信号通路注释,再利用RT-qPCR技术通过测定特征mRNA表达量的变化来验证转录组测序的准确性。结果表明,RT-qPCR分析的10个基因表达量的变化幅度与RNA-seq结果的变化幅度相似,验证了RNA-seq结果的可重复性和可靠性。RNA-seq结果中MMP 2和MMP 16的基因表达量均显着上调。生物信息分析证明了嫩化过程中主要包含氧化应激、固有免疫反应、细胞凋亡、细胞骨架蛋白和细胞外基质蛋白重组等生物学进程,且彼此间存在交互作用。从基因表达水平上揭示了内源酶介导嫩化的分子机制。综上,海参体壁的低温嫩化是较为复杂的生物学过程,内源酶cathespins、calpains、caspases、proteasomes和MMPs均参与其中,同时涉及氧化应激、固有免疫反应、细胞凋亡、细胞骨架蛋白和细胞外基质蛋白重组等生物学进程。其中氧化作用不仅对内源酶等生物信号的激活至关重要,还可直接破坏胶原纤维结构。
戴媛媛[10]（2019）在《金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控巨噬细胞自噬促进hVISA免疫逃逸的分子机制研究》文中指出金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界中,可分泌多种毒力因子以及表面黏附蛋白,能引起菌血症、肺炎、心内膜炎、化脓性关节炎、中耳炎、深部脓肿等严重感染。金黄色葡萄球菌具有较强的存活能力和免疫逃逸能力,常导致慢性迁延性感染。其免疫逃逸机制,一方面与细菌本身的毒力因子,如毒素、酶和表面黏附因子等因素有关;另一方面可能通过与宿主细胞的相互作用,消减或抑制宿主免疫防御功能。近年来,随着万古霉素广泛应用于临床,异质性万古霉素中介金黄色葡萄球菌（hVISA）菌株不断出现。针对hVISA的研究显示,不但抗菌药物难以发挥作用,机体免疫系统也难以将其清除。hVISA在宿主体内免疫逃逸的分子机制尚不清楚,因此,深入探讨hVISA与宿主免疫系统之间的相互作用,将有助于我们理解金黄色葡萄球菌逃避宿主免疫反应并实现持续性感染的分子机制,为寻找新的治疗靶点提供理论依据。巨噬细胞是人体固有免疫系统重要的组成部分,具有强大的识别、吞噬、清除细菌及外来异物的功能。自噬是广泛存在于真核细胞中的一种机体生存,分化,发育,代谢所必须的自稳机制,作为天然免疫中重要的组成部分,同时也作为机体自我保护的生理学行为,在抵抗病原微生物感染以及其导致的炎症中发挥关键作用。但有些病原体已经进化出能抵抗或者逃避自噬清除的机制。有研究显示,金黄色葡萄球菌可以诱导宿主细胞产生亲细菌自噬,这种自噬将有助于金黄色葡萄球菌在宿主细胞内存活。本课题组此前一直关注金黄色葡萄球菌万古霉素耐药相关二元调控系统VraSR在金黄色葡萄球菌内的调控作用,发现它不但可以调控金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药,还可以与全局调控子Agr启动子区域直接结合,表明VraSR有较广泛的调控功能。进一步研究还发现,VraSR可以促进金黄色葡萄球菌粘附于上皮细胞,并增强其抵抗人中性粒细胞的吞噬及杀菌,协助hVISA逃避人体免疫系统的攻击。然而,VraSR参与调控金黄色葡萄球菌毒力的效应和其在免疫逃逸机制方面中发挥的作用尚不清楚。本研究将从细菌、动物和细胞三个方面来研究VraSR在hVISA的致病性调控网络中的作用以及其通过调控巨噬细胞自噬促进其免疫逃逸的分子机制。目的:本研究以hVISA标准菌株（Mu3）及其vraSR基因敲除株（Mu3ΔvraSR）和回补株（Mu3ΔvraSR-C）为研究对象,通过转录组学、动物实验和胞内生存实验深入探讨VraSR在金黄色葡萄球菌中的调控网络及其与金黄色葡萄球菌致病性的关系,并从细胞水平研究VraSR参与调控巨噬细胞自噬促进金黄色葡萄球菌免疫逃逸的分子机制,其结果将为寻找金黄色葡萄球菌感染诊疗新方法奠定理论基础。方法:（1）获取rVraR纯化蛋白和兔源VraR多克隆抗体,并利用qRT-PCR和Western blot鉴定本室保存的hVISA原代菌株（Mu3）、vraSR基因敲除株（Mu3ΔvraSR）及其回补株（Mu3ΔvraSR-C）的VraSR表达水平,确认菌株构建成功;（2）选择Mu3株和Mu3ΔvraSR株提取RNA,采用RNA-seq技术并结合生物信息学分析,筛选出Mu3株和Mu3ΔvraSR株中差异表达基因用qRT-PCR验证,揭示VraSR在金黄色葡萄球菌中的调控网络和致病性的关系;（3）将Mu3、Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C分别以皮下接种方式感染BALB/c小鼠,建立小鼠皮肤脓肿模型,观察VraSR对小鼠皮肤脓肿面积的影响;通过计算小鼠皮下脓肿内细菌CFU,观察VraSR对金黄色葡萄球菌在皮肤内生存的影响;通过小鼠皮肤脓肿组织H&E染色,观察皮肤组织炎症病理变化;（4）将Mu3、Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C分别以尾部静脉注射方式感染BALB/c小鼠,建立小鼠败血症模型,通过计算小鼠肝脏和肾脏细菌CFU,观察VraSR对金黄色葡萄球菌在体内生存的影响;通过小鼠肝脏和肾脏HE染色,观察肝脏和肾脏炎症病理变化;（5）将Mu3、Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C分别感染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7建立体外感染模型,收集感染后0h、3h、6h、12h和24h的RAW 264.7细胞,利用平板菌落计数法计算不同感染组胞内细菌菌落形成单位（CFU）;（6）将Mu3、Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C分别感染RAW 264.7细胞后,用透射电子显微镜观察金黄色葡萄球菌感染RAW 264.7后细胞的超微结构,比较不同感染组细胞内自噬体样囊泡的形成情况;分别于0h、1.5h、3h、4.5h和6h收集三株金黄色葡萄球菌感染后的细胞,用qRT-PCR检测自噬过程三个关键基因Ulk1、Becn1和Atg5的mRNA转录水平;收集感染后3h细胞,利用Western blot技术检测LC3的转化水平和P62的降解水平;用mRFP-GFP-LC3腺病毒转染RAW 264.7细胞,金黄色葡萄球菌与该细胞共作用3h后,在激光共聚焦显微镜下观察金黄色葡萄球菌感染后细胞内LC3的点状聚集;利用不同阶段的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和巴弗洛霉素（Baf A1）预处理,比较不同菌株的生长速率,排除其对金黄色葡萄球菌生长速率的影响;利用Western blot技术比较不同感染组LC3的转化水平和P62的降解水平以及不同菌株在细胞内的生存率;（7）为了研究VraSR参与调控巨噬细胞自噬的具体分子机制,我们用Western blot检测了AKT/mTOR/P70S6K和p38信号通路,并用p38抑制剂（SB203580）进行验证。结果:（1）通过qRT-PCR和Western blotting技术对Mu3,Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株中vraSR基因的mRNA转录水平和蛋白表达水平进行检测,发现在Mu3ΔvraSR株中vraSR基因缺失表达,Mu3ΔvraSR-C菌株回复了vraSR基因表达,证实Mu3ΔvraSR和Mu3ΔvraSR-C菌株VraSR基因敲除和回补成功。（2）转录组分析结果显示,与金黄色葡萄球菌Mu3菌株相比,在Mu3ΔvraSR菌株中共有1210个基因发生改变,其中421个基因表达显着下调,789个基因的表达显着上调;与二元调控系统相关的基因有14个,与毒力相关的基因有23个发生显着性变化;经过GO聚类分析,发现VraSR的调控主要富集在细胞过程、定植、代谢等过程;KEGG通路分析显示,VraSR调控的基因主要在代谢途径、氨基酸生物合成和ABC转运等途径等通路中富集。利用qRT-PCR验证显示,检测基因的变化趋势和转录组测序结果一致,证实基因转录组测序结果可信;与Mu3株相比,Mu3ΔvraSR株中saeR、clfA、hla、hlb、tst、essA、dltb、efb、sodA和sbi基因下调,而agrA、sdrE、coa和spa基因上调,说明VraSR调控金黄色葡萄球菌的致病性,导致Mu3ΔvraSR的毒力多效性改变。（3）小鼠皮肤脓肿实验结果显示:与Mu3株相比,Mu3ΔvraSR株形成的脓肿面积减小,脓肿内Mu3ΔvraSR株细菌存活数量减低,白细胞浸润、炎症反应和组织结构破坏也较轻;回补VraSR基因后,回补株Mu3ΔvraSR-C导致小鼠皮肤脓肿面积、菌落计数及组织炎症反应与Mu3株引起的感染相似,表明VraSR有助于金黄色葡萄球菌在小鼠皮肤内形成脓肿,并有助于其在小鼠皮肤内存活。（4）小鼠败血症模型结果显示,与Mu3株相比,Mu3ΔvraSR株在肝脏和肾脏的菌落计数明显减低,白细胞浸润及组织坏死程度也较轻;回补VraSR基因后,回补株Mu3ΔvraSR-C株菌落计数得以显着回复,病理特征也和Mu3株引起的感染相似,表明VraSR有助于金黄色葡萄球菌在小鼠肝脏和肾脏形成脓肿,并有助于其在小鼠体内生存和繁殖。（5）细胞内生存实验结果显示:与野生型菌株Mu3相比,Mu3ΔvraSR菌株在RAW 264.7细胞中存活较少,且在整个感染过程中Mu3ΔvraSR菌株的存活率持续下降。当VraSR回补后,Mu3ΔvraSR-C株在RAW 264.7细胞中的存活率与Mu3相似,表明VraSR有助于金黄色葡萄球菌抵抗巨噬细胞清除,并有利于其在巨噬细胞内存活和增殖。（6）透射电子电镜结果显示,Mu3?vraSR株感染组仅观察到少量的自噬体样囊泡（8±1.5/50 cells）（P<0.01）,而Mu3株（27±2.5/50 cells）和Mu3?vraSR-C株（23±1.5/50 cells）有较多的自噬体样囊泡,表明VraSR有助于金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后自噬体样囊泡的形成;qRT-PCR检测结果发现,与Mu3株感染细胞相比,Mu3?vraSR株感染的细胞在3 h时的Becn1和Atg5转录水平显着降低（P<0.01）,而回补VraSR后,Mu3?vraSR-C感染的细胞的Becn1和Atg5转录水平回复到Mu3株水平,说明VraSR有助于金黄色葡萄球菌感染巨噬细胞后自噬基因的表达;Western blot分析结果显示,Mu3?vraSR感染细胞中的LC3-II和p62表达水平明显低于Mu3和Mu3?vraSR-C感染组（P<0.01）,表明VraSR参与金黄色葡萄球菌感染RAW 264.7细胞自噬流的调控;激光共聚焦结果显示,与Mu3感染组比较,Mu3?vraSR感染组在3h时具有较少的LC3黄色点状聚集（P<0.01）,而Mu3?vraSR-C感染组与Mu3感染组相似,有较多的黄色点状聚集,再次表明VraSR促进了金黄色葡萄球菌感染细胞内自噬体的形成;Mu3?vraSR感染组比其他两组具有更多的单红LC3点状聚集（P<0.01）,表明VraSR可以阻断或延迟RAW 264.7细胞内自噬体与溶酶体的融合;自噬抑制剂处理后结果显示,3-MA可降低RAW 264.7细胞的LC3-II表达水平,并显着降低了Mu3和Mu3ΔvraSR-C菌株胞内存活率（P<0.01）;Baf A1处理组显着增加了所有感染组的p62蛋白表达水平,Mu3ΔvraSR感染组细菌存活率显着增加。以上结果表明,VraSR可通过抑制巨噬细胞自噬流以提高金黄色葡萄球菌胞内存活率。（7）Western blot检测结果显示,三株细菌感染细胞的AKT、mTOR和P70S6K蛋白表达水平及磷酸化水平变化无显着性差异,但Mu3?vraSR感染组p38蛋白磷酸化表达水平变化显着降低,回补VraSR后,回复株Mu3?vraSR-C感染组可以回复p38磷酸化表达水平。当加入p38磷酸化水平抑制剂后,Mu3感染组和Mu3?vraSR-C感染组p62蛋白表达水平显着下降,细菌在细胞内的生存率显着降低,与Mu3?vraSR感染组的p62表达水平类似。以上结果表明,VraSR可以通过激活p38磷酸化来抑制自噬体的成熟,阻止自噬体与溶酶体融合,而不受AKT/mTOR/p70S6K信号通路调控。结论:（1）金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控hVISA菌株的致病性,导致hVISA菌株的毒力多效性改变。（2）金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR有助于hVISA菌株在动物体内和巨噬细胞内生存。（3）金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR有助于hVISA菌株诱导巨噬细胞自噬促进细菌在细胞内生存。（4）hVISA菌株通过VraSR高表达来激活p38磷酸化,抑制自噬体的成熟,阻止自噬体与溶酶体融合,而不依赖于AKT/mTOR/p70S6K途径。
二、Expression of Tenascin and Fibronectin in Nasal Polyps（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Expression of Tenascin and Fibronectin in Nasal Polyps（论文提纲范文）
（2）子宫内膜癌关键基因的筛选及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 子宫内膜癌概述 |
| 1.2 MYBL2 的功能 |
| 1.3 MYBL2 促进肿瘤发生的作用机制 |
| 参考文献 |
| 第一部分 子宫内膜癌全基因组差异性表达及生存分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 数据库及软件 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 TCGA数据的子宫内膜癌全基因表达分析及GEO数据验证 |
| 2.2 MYBL2 表达和肿瘤预后的相关性 |
| 2.3 MYBL2 过表达与子宫内膜癌关系 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 MYBL2 蛋白在子宫内膜癌组织中的表达与临床特征的关系 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 MYBL2 蛋白在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达情况 |
| 2.2 MYBL2 蛋白表达与子宫内膜癌各项临床病理特征的关系 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 MYBL2 基因沉默对子宫内膜癌细胞增殖的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器设备 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 1.5 方法 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 MYBL2 敲低抑制子宫内膜癌细胞系增殖 |
| 2.2 差异表达基因的确定及KEGG通路富集分析 |
| 2.3 MYBL2 基因敲低抑制子宫内膜癌细胞系周期进程,促进细胞凋亡 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 第2章 讨论 |
| 第3章 结论与展望 |
| 3.1 结论 |
| 3.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附表 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 论文综述 MYBL2 在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）MiR-146a通过TRAF6抑制CRSwNP中HNE诱导的MUC5AC表达的研究机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 CRSwNP患者鼻黏膜组织中MiR-146a、MUC5AC和 TRAF6 的表达情况 |
| 2.1 实验选材与实验步骤 |
| 2.1.1 采集样本并将样本进行分组 |
| 2.1.2 采集样品 |
| 2.1.3 免疫组化检测鼻黏膜组织中MUC5AC、TRAF6 的表达 |
| 2.1.4 qRT-PCR检测样本中MiR-146a、MUC5AC和TRAF6的m RNA表达 |
| 2.1.5 统计结果 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 鼻黏膜组织中MUC5AC、TRAF6的分泌 |
| 2.2.2 鼻黏膜组织中MiR-146a、MUC5AC和 TRAF6的mRNA表达 |
| 第3章 体外培养原代上皮细胞 |
| 3.1 实验选材与步骤 |
| 3.1.1 体外培养原代细胞 |
| 3.1.2 实时荧光定量PCR检测各分组MiR-146a、MUC5AC、TRAF6 m RNA的表达 |
| 3.1.3 ELISA检测实验不同组别Muc5AC的表达 |
| 3.1.4 WB检测各组细胞TRAF6蛋白的表达情况 |
| 3.1.5 数据处理及统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 HNECs细胞培养 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR检测各组细胞MIR-146a、MUC5AC、TRAF6 m RNA的表达情况 |
| 3.2.3 酶联免疫吸附实验测定各分组MUC5AC的表达 |
| 3.2.4 WB检测每个细胞分组中TRAF6 蛋白的表达 |
| 第4章 双荧光素酶报告基因鉴定 |
| 4.1 实验器材及试剂 |
| 4.1.1 实验器材 |
| 4.1.2 主要实验试剂 |
| 4.1.3 实验步骤 |
| 4.1.4 结果 |
| 第5章 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 6.1 结论 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）T2DM血清Periostin与尿微量白蛋白相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第1章 临床研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 研究对象的选择 |
| 1.1.2 标本采集 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要实验设备 |
| 1.2 血清指标的测定 |
| 1.2.1 收集基本信息及相关实验室结果 |
| 1.2.2 ELISA法测定血清POSTN表达水平 |
| 1.2.3 统计学处理 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 两组数据比较 |
| 1.3.2 微量蛋白尿组与对照组血脂水平的比较 |
| 1.3.3 微量蛋白尿组与对照组血清POSTN水平比较 |
| 1.3.4 相关性分析 |
| 1.3.5 血清POSTN影响因素的分析 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 第2章 综述 Periostin研究进展 |
| 2.1 概述 |
| 2.2 POSTN相关生理作用机制 |
| 2.3 POSTN与泌尿系统疾病之间的关系 |
| 2.4 POSTN与心血管系统疾病之间的关系 |
| 2.5 POSTN与呼吸系统疾病之间的关系 |
| 2.6 POSTN与肿瘤疾病之间的关系 |
| 2.7 POSTN与糖尿病之间的关系 |
| 2.8 POSTN与其他疾病之间的关系 |
| 2.9 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（5）抗阻、有氧运动对ITGB1信号通路介导的骨骼肌肥大的影响（论文提纲范文）
| 论文摘要 |
| abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 肌卫星细胞概述 |
| 1.2 衰老、运动与肌卫星细胞激活 |
| 1.3 衰老、运动与肌肉蛋白质合成 |
| 1.3.1 mTORC1 与肌肉蛋白质合成 |
| 1.3.2 运动与mTORC1 信号通路 |
| 1.4 ITGB1 及其在肌肉肥大信号转导中的作用 |
| 1.4.1 ITG |
| 1.4.2 ITGB1与ECM的连接 |
| 1.4.3 ITGB1与FAK/SRC信号通路 |
| 1.4.4 ITGB1 对肌肉生长的影响 |
| 2 实验部分 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 主要实验试剂 |
| 2.3 主要实验仪器 |
| 2.4 实验对象、运动方案和样本采集 |
| 2.4.1 实验对象 |
| 2.4.2 动物分组与运动方案 |
| 2.4.3 取材 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.5.1 抓握力测量 |
| 2.5.2 免疫荧光 |
| 2.5.3 Western Blotting |
| 2.6 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠体重和腓肠肌湿重及两者比值的变化 |
| 3.2 小鼠抓握力的变化 |
| 3.3 不同组别小鼠腓肠肌Pax7和Myf5 的蛋白表达结果比较 |
| 3.4 不同组别小鼠腓肠肌mTORC1 磷酸化水平的比较 |
| 3.5 不同组别小鼠腓肠肌ITGB1和FAK、SRC磷酸化水平的比较 |
| 3.6 不同组别小鼠腓肠肌胶原蛋白和laminin免疫荧光比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 抗阻、有氧运动对小鼠体重的影响 |
| 4.2 抗阻、有氧运动对小鼠肌肉力量的影响 |
| 4.3 抗阻、有氧运动通过ITGB1-胶原蛋白对肌卫星细胞的影响 |
| 4.4 抗阻、有氧运动通过ITGB1-FAK/SRC对肌肉蛋白质合成的影响 |
| 4.5 ITGB1 介导运动促进肌肉肥大的机制分析 |
| 5 结论 |
| 6 研究总结 |
| 6.1 特色与创新 |
| 6.2 研究不足 |
| 7 参考文献 |
| 8 附录 |
| 英文缩略词表 |
| 动物伦理审查表 |
| 9 致谢 |
（6）低氧下G2A对巨噬细胞极化调控的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 2.研究方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 文献综述 低氧下 G2A 对炎症反应的影响 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（8）黏膜固有免疫屏障在真菌性鼻窦炎发病中的研究进展（论文提纲范文）
| 1 FRS致病真菌的种类 |
| 2 各型FRS的黏膜镜下组织病理学改变 |
| 3 与FRS相关的黏膜固有免疫屏障缺陷 |
| 3.1 黏膜上皮屏障 |
| 3.2 固有免疫细胞的PRR |
| 3.3 固有免疫分子 |
| 3.3.1 IL |
| 3.3.2 Maspin |
| 4 小结 |
（9）低温辅助内源酶主导的海参嫩化分子机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 海参的概述 |
| 1.1.1 海参 |
| 1.1.2 海参体壁的组织结构 |
| 1.1.2.1 胶原蛋白 |
| 1.1.2.2 蛋白聚糖和糖蛋白 |
| 1.2 嫩化的研究进展 |
| 1.2.1 嫩度的定义 |
| 1.2.2 影响嫩度的因素 |
| 1.2.2.1 结缔组织对嫩度的影响 |
| 1.2.2.2 肌纤维对嫩度的影响 |
| 1.2.2.3 肌浆蛋白对嫩度的影响 |
| 1.2.2.4 蛋白降解对嫩度的影响 |
| 1.2.3 嫩化的机理 |
| 1.2.3.1 钙激活蛋白酶 |
| 1.2.3.2 组织蛋白酶 |
| 1.2.3.3 蛋白酶体 |
| 1.2.3.4 细胞凋亡酶 |
| 1.2.4 嫩化的方法 |
| 1.2.4.1 物理嫩化法 |
| 1.2.4.2 生物化学嫩化法 |
| 1.2.4.3 基因工程嫩化法 |
| 1.2.5 嫩度的评价及其机理的研究方法 |
| 1.2.5.1 质构评价法 |
| 1.2.5.2 组织微观结构成像法 |
| 1.2.5.3 蛋白结构测定法 |
| 1.2.5.4 蛋白特性分析法 |
| 1.2.5.5 组学分析法 |
| 1.3 海参内源酶的研究进展 |
| 1.3.1 内源酶的分离纯化及酶学特征研究 |
| 1.3.2 内源酶对海参体壁降解作用的研究 |
| 1.4 氧化应激诱导内源酶激活的研究进展 |
| 1.4.1 氧化应激诱导calpain激活 |
| 1.4.2 氧化应激诱导cathepsin激活 |
| 1.4.3 氧化应激诱导caspase激活 |
| 1.4.4 氧化应激诱导MMP激活 |
| 1.5 课题的提出及意义 |
| 1.6 本论文的主要内容 |
| 1.7 技术路线 |
| 第二章 海参体壁低温嫩化过程中理化特性与水溶性蛋白结构的变化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料与仪器 |
| 2.2.1.1 原料 |
| 2.2.1.2 实验仪器 |
| 2.2.1.3 实验试剂 |
| 2.2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2.2 形态特征的观察 |
| 2.2.3 海参体壁的嫩化处理 |
| 2.2.4 海参体壁的嫩度表征 |
| 2.2.4.1 质构的测定 |
| 2.2.4.2 流变特性的测定 |
| 2.2.5 海参体壁胶原的结构变化分析 |
| 2.2.5.1 变性温度的测定 |
| 2.2.5.2 胶原热溶解性的测定 |
| 2.2.5.3 石蜡切片的制作 |
| 2.2.5.4 石蜡切片天狼星红-苏木素染色 |
| 2.2.5.5 冷场SEM样品的制备 |
| 2.2.6 海参体壁水溶性蛋白的结构变化分析 |
| 2.2.6.1 水溶性蛋白的提取 |
| 2.2.6.2 考马斯亮蓝G-250 法测定蛋白含量 |
| 2.2.6.3 羰基含量的测定 |
| 2.2.6.4 游离巯基含量的测定 |
| 2.2.6.5 游离氨基含量的测定 |
| 2.2.6.6 蛋白分布模式 |
| 2.2.6.7 二级结构的测定 |
| 2.2.6.8 表面疏水性的测定 |
| 2.2.7 海参体壁自由基生成情况的测定 |
| 2.2.8 统计学分析方法 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 海参体壁嫩化过程中的形态特征 |
| 2.3.2 海参体壁嫩化过程中的嫩度表征 |
| 2.3.2.1 海参体壁嫩化过程中的质构特征 |
| 2.3.2.2 海参体壁嫩化过程中流变特征 |
| 2.3.3 海参体壁嫩化过程中的胶原结构变化 |
| 2.3.3.1 海参体壁嫩化过程中胶原蛋白变性温度的变化 |
| 2.3.3.2 海参体壁嫩化过程中胶原蛋白热溶解性的变化 |
| 2.3.3.3 海参体壁嫩化过程中的微观结构变化 |
| 2.3.3.4 海参体壁嫩化过程中的超微结构变化 |
| 2.3.4 海参体壁嫩化过程中水溶性蛋白的结构变化 |
| 2.3.4.1 羰基含量 |
| 2.3.4.2 游离巯基含量 |
| 2.3.4.3 游离氨基含量 |
| 2.3.4.4 蛋白分布模式 |
| 2.3.4.5 二级结构 |
| 2.3.4.6 表面疏水性 |
| 2.3.5 海参体壁嫩化过程中自由基生成情况 |
| 2.4 小结 |
| 第三章 海参体壁低温嫩化过程中内源酶的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料与仪器 |
| 3.2.1.1 原料 |
| 3.2.1.2 主要仪器 |
| 3.2.1.3 实验试剂 |
| 3.2.1.4 主要试剂配制 |
| 3.2.2 海参的嫩化处理 |
| 3.2.3 海参体壁低温嫩化过程中内源酶活力的测定 |
| 3.2.3.1 Cathepsin L活力的测定 |
| 3.2.3.2 Caspse-3 活力的测定 |
| 3.2.3.3 MMPs活力的测定 |
| 3.2.4 胶原酶对海参体壁的降解作用的评价 |
| 3.2.4.1 胶原酶对不溶性蛋白降解作用的评价 |
| 3.2.4.2 胶原酶对海参体壁组织降解作用的评价 |
| 3.2.5 蛋白酶抑制剂对海参低温嫩化过程中作用的评价 |
| 3.2.5.1 蛋白的提取 |
| 3.2.5.2 TCA可溶性寡肽含量的测定 |
| 3.2.5.3 羟脯氨酸含量的测定 |
| 3.2.5.4 蛋白分布 |
| 3.2.6 统计学分析方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 海参体壁低温嫩化过程中内源酶活力的变化 |
| 3.3.1.1 Cathepsin L活力 |
| 3.3.1.2 Caspse-3 活力 |
| 3.3.1.3 MMPs活力 |
| 3.3.2 胶原酶对海参体壁的降解情况 |
| 3.3.2.1 胶原酶对不溶性蛋白的降解情况 |
| 3.3.2.2 胶原酶对海参体壁组织的降解情况 |
| 3.3.3 蛋白酶抑制剂对海参体壁低温嫩化过程中蛋白降解的作用 |
| 3.3.3.1 TCA可溶性寡肽的含量 |
| 3.3.3.2 羟脯氨酸的含量 |
| 3.3.3.3 蛋白分布模式 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 氧化和热处理对海参体壁胶原纤维的作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料与仪器 |
| 4.2.1.1 原料 |
| 4.2.1.2 实验仪器 |
| 4.2.1.3 实验试剂 |
| 4.2.1.4 主要试剂配制 |
| 4.2.2 海参胶原纤维的提取 |
| 4.2.3 CF的氧化和热处理模型的建立 |
| 4.2.4 EGCG对 CF热处理模型的作用 |
| 4.2.5 模型中自由基生成情况的测定 |
| 4.2.6 溶出液中化学组成的分析 |
| 4.2.6.1 蛋白含量的测定 |
| 4.2.6.2 GAG含量的测定 |
| 4.2.6.3 SDS-PAGE |
| 4.2.6.4 蛋白分子量分布的测定 |
| 4.2.7 CF结构变化分析 |
| 4.2.7.1 自由基残留量的测定 |
| 4.2.7.2 FTIR分析 |
| 4.2.7.3 变性温度的测定 |
| 4.2.7.4 热重分析 |
| 4.2.7.5 SEM观察 |
| 4.2.8 统计学分析方法 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 海参CF氧化和热处理模型中自由基的生成情况 |
| 4.3.2 氧化和热处理CF后溶出物组分的变化 |
| 4.3.2.1 蛋白相对溶出量 |
| 4.3.2.2 GAG相对溶出量 |
| 4.3.2.3 溶出蛋白的分布模式 |
| 4.3.2.4 溶出蛋白的分子量分布 |
| 4.3.3 氧化和热处理后CF蛋白结构的变化 |
| 4.3.3.1 自由基残留量分析 |
| 4.3.3.2 二级结构分析 |
| 4.3.3.3 变性温度分析 |
| 4.3.3.4 热重分析 |
| 4.3.3.5 SEM观察的微观结构 |
| 4.3.4 EGCG对海参CF热处理模型的作用 |
| 4.3.4.1 自由基的相对生成量 |
| 4.3.4.2 GAG相对溶出量 |
| 4.3.4.3 溶出蛋白的分布模式 |
| 4.3.4.4 溶出蛋白的分子量分布 |
| 4.3.4.5 自由基残留量分析 |
| 4.3.4.6 二级结构分析 |
| 4.3.4.7 变性温度分析 |
| 4.3.4.8 热重分析 |
| 4.3.4.9 SEM观察的微观结构 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 海参体壁低温嫩化过程中蛋白组的差异性 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料与仪器 |
| 5.2.1.1 原料 |
| 5.2.1.2 实验仪器 |
| 5.2.1.3 实验试剂 |
| 5.2.2 海参的嫩化处理 |
| 5.2.3 蛋白的提取 |
| 5.2.4 蛋白分布的模式 |
| 5.2.5 蛋白的酶解 |
| 5.2.6 iTRAQ标记 |
| 5.2.7 SCX分离 |
| 5.2.8 LC-ESI-MSMS分析 |
| 5.2.9 iTRAQ数据定性定量分析 |
| 5.2.10 生物信息学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 蛋白样品的质量评价 |
| 5.3.2 蛋白鉴定结果 |
| 5.3.2.1 蛋白鉴定统计信息 |
| 5.3.2.2 蛋白相对分子质量分布 |
| 5.3.2.3 肽段长度分布 |
| 5.3.2.4 肽段序列覆盖度 |
| 5.3.2.5 Unique肽段数量分布 |
| 5.3.3 差异蛋白分析 |
| 5.3.3.1 差异表达蛋白的统计 |
| 5.3.3.2 差异表达蛋白的GO富集分析 |
| 5.3.3.3 差异蛋白的KEGG分析 |
| 5.3.3.4 与海参低温嫩化相关差异蛋白的分析 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 海参体壁低温嫩化过程中转录组的差异性 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 材料与仪器 |
| 6.2.1.1 原料 |
| 6.2.1.2 实验仪器 |
| 6.2.1.3 实验试剂 |
| 6.2.2 海参的嫩化处理 |
| 6.2.3 RNA的提取及质检 |
| 6.2.4 cDNA文库的构建和测序 |
| 6.2.5 参考序列比、差异表达基因筛选以及功能分析 |
| 6.2.6 RT-qPCR |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 RNA提取样品的质量评价 |
| 6.3.2 数据库的统计 |
| 6.3.2.1 测序序列的统计及质量评价 |
| 6.3.2.2 样本重复相关性检查 |
| 6.3.2.3 参考基因组比对统计 |
| 6.3.2.4 参考基因组比对区域分布 |
| 6.3.2.5 海参数据库注释信息的统计 |
| 6.3.3 基因总体表达水平分析 |
| 6.3.3.1 样本不同基因表达值区间分布统计 |
| 6.3.3.2 样本基因转录本覆盖深度统计 |
| 6.3.3.3 基因表达值密度 |
| 6.3.4 差异基因表达结果 |
| 6.3.4.1 差异基因的统计 |
| 6.3.4.2 差异基因的GO分析 |
| 6.3.4.3 差异基因的KEGG分析 |
| 6.3.4.4 与海参低温嫩化相关差异基因的分析 |
| 6.3.5 RT-qPCR验证结果 |
| 6.3.6 蛋白组与转录组的关联分析 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 结论、展望、创新点 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 7.3 创新点 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文及科研成果 |
| 致谢 |
| 附录 |
（10）金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控巨噬细胞自噬促进hVISA免疫逃逸的分子机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstarct |
| 第一章 金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR有助于hVISA菌株免疫逃逸 |
| 1.前言 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 实验细胞和菌株 |
| 2.2 保存菌株的复苏与鉴定 |
| 2.3 实验动物 |
| 2.4 实验引物 |
| 2.5 主要试剂 |
| 2.6 主要仪器设备 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 Vra R重组蛋白的纯化 |
| 3.2 兔源VraR蛋白多克隆抗体的制备 |
| 3.3 金黄色葡萄球菌基因转录组测序 |
| 3.4 实时定量多聚酶链反应(Quantitative Real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测 |
| 3.5 Western blotting检测VraR蛋白表达量 |
| 3.6 生长曲线测定 |
| 3.7 动物实验 |
| 3.8 RAW264.7 细胞培养 |
| 3.9 金黄色葡萄球菌在RAW264.7 细胞内生存实验 |
| 3.10 数据统计分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 VraSR调控hVISA菌株致病性,导致细菌毒力的多效性改变 |
| 4.2 VraSR有助于hVISA菌株在小鼠体内和巨噬细胞内生存 |
| 5.讨论 |
| 第二章 金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控巨噬细胞自噬并促进hVISA菌株免疫逃逸的分子机制研究 |
| 1.前言 |
| 2.实验材料 |
| 2.1 实验细胞和菌株 |
| 2.2 基因工程载体 |
| 2.3 实验引物 |
| 2.4 主要试剂 |
| 2.5 主要仪器设备 |
| 3.实验方法 |
| 3.1 透射电镜标本制备及观察 |
| 3.2 qRT-PCR检测自噬基因表达 |
| 3.3 Western blotting检测自噬蛋白及信号通路蛋白表达 |
| 3.4 mRFP-GFP-LC3 腺病毒转染 |
| 3.5 激光共聚焦显微镜检测自噬流 |
| 3.6 3-MA、BafA1和SB203580 最佳浓度的确定 |
| 3.7 3-MA、BafA1和SB203580 对金黄色葡萄球菌在巨噬细胞内存活的影响 |
| 3.8 数据统计分析 |
| 4.结果 |
| 4.1 VraSR有助于hVISA菌株感染巨噬细胞后自噬体样囊泡的形成 |
| 4.2 VraSR有助于hVISA菌株感染巨噬细胞后自噬关键基因的表达 |
| 4.3 VraSR参与h VISA菌株感染巨噬细胞后LC3的转化和P62的降解 |
| 4.4 VraSR参与hVISA菌株感染巨噬细胞后自噬流的抑制 |
| 4.5 hVISA菌株通过VraSR高表达激活p38 磷酸化来调控巨噬细胞自噬,而不依赖于AKT/mTOR/P70S6K途径 |
| 5.讨论 |
| 6.结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
四、Expression of Tenascin and Fibronectin in Nasal Polyps（论文参考文献）
- [1]外泌体调控鼻息肉发病机制的研究进展[J]. 潘仰望,臧洪瑞. 国际耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2021(04)
- [2]子宫内膜癌关键基因的筛选及分子机制研究[D]. 乐露露. 南昌大学, 2021(01)
- [3]MiR-146a通过TRAF6抑制CRSwNP中HNE诱导的MUC5AC表达的研究机制[D]. 谢艳华. 南昌大学, 2020(08)
- [4]T2DM血清Periostin与尿微量白蛋白相关性研究[D]. 牟书敏. 华北理工大学, 2020(02)
- [5]抗阻、有氧运动对ITGB1信号通路介导的骨骼肌肥大的影响[D]. 谢娇娇. 华东师范大学, 2020(11)
- [6]低氧下G2A对巨噬细胞极化调控的研究[D]. 闫威. 内蒙古医科大学, 2020(03)
- [7]Wnt/β-catenin信号通路与哮喘气道重塑的研究进展[J]. 吴汉平. 国际儿科学杂志, 2020(03)
- [8]黏膜固有免疫屏障在真菌性鼻窦炎发病中的研究进展[J]. 刘海宁,杨国棠,陈长康,杨贵. 医学综述, 2020(05)
- [9]低温辅助内源酶主导的海参嫩化分子机理研究[D]. 董秀芳. 大连工业大学, 2019(08)
- [10]金黄色葡萄球菌二元调控系统VraSR调控巨噬细胞自噬促进hVISA免疫逃逸的分子机制研究[D]. 戴媛媛. 安徽医科大学, 2019(08)